ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА

Для изучения строения и функции клеток и тканей человека, животных и растительных организмов в норме, патологии и эксперименте применяются гистологические методы исследования. Основой гистологических методов исследования является гистологическая техника — комплекс методических приемов, используемых при изготовлении препаратов клеток и тканей для их микроскопического исследования. Микроскопическое изучение клеток и тканей может проводиться двумя основными путями в зависимости от состояния исследуемого объекта: исследование живых клеток и тканей, исследование неживых клеток и тканей, сохраняющих структуру благодаря специальным приемам фиксации.

Изготовление гистологических препаратов

Важнейшим условием постановки правильного гистологического диагноза является высокое качество микроскопических препаратов. Современный уровень развития гистологической техники позволяет не только обеспечить это условие, но и ускорить процесс получения результатов гистологических исследований, а также существенно облегчить труд лаборантов-гистологов.

Гистологическая лаборатория

Гистологическая лаборатория может быть организована в составе клинико-диагностической лаборатории, патологоанатомического бюро лечебно-профилактического учреждения, бюро судебно-медицинской экспертизы, кафедр гистологии, цитологии и эмбриологии и патологической анатомии медицинских вузов, НИИ медико-биологического профиля.

Руководить гистологической лабораторией может врач или биолог с высшим образованием, прошедший специализацию по лабораторной диагностике, знающий гистологическую технику и имеющий стаж работы. В штат лаборатории входят медицинский технолог, медицинский лабораторный техник, лаборанты со средним специальным образованием по специальности «Медико-диагностическое дело».

Помещения для гистологической лаборатории должны иметь центральное водоснабжение, канализацию, электроснабжение и хорошую принудительную вытяжную вентиляцию. Последнее необходимо в связи с тем, что сотрудники лаборатории постоянно используют в работе летучие, а иногда и ядовитые вещества.

Мебель должна включать лабораторные столы и стулья; вытяжные шкафы; шкафы для хранения реактивов, лабораторной посуды, гистологических препаратов; сейф для хранения ядовитых веществ и прекурсоров; металлические ящики, имеющие поддоны с песком, для хранения кислот.

Оснащение гистологической лаборатории

Оборудование:

• — холодильник для хранения реактивов;
• — камера глубокого охлаждения для хранения биологического материала (—80 °C);
• — термостаты для инкубации срезов при проведении гистохимических реакций (37 °C) и хранения расплавленного парафина (56 °C);
• — плитки для подогрева и расправления парафиновых срезов;
• — аппараты для изготовления гистологических срезов (микротомы, криостат, вибротомы);
• — разнообразные лабораторные весы, в том числе аналитические;
• — рН-метр;
• — дистиллятор для перегонки воды;
• — сухожаровой шкаф (для сушки лабораторной посуды после мытья);
• — сосуды Дьюара (металлическая колба с двойными стенками и вакуумированным межстеночным пространством; в медицине используется для хранения биологических материалов при низких температурах);
• — штативы для пробирок и пипеток;
• — песочные часы, секундомеры, часы с сигналом;
• — центрифуги на 1...3 тыс. об/мин;
• — станок для заточки и правки микротомных ножей.

В крупных гистологических лабораториях, где ежедневно исследуются сотни и тысячи образцов биологического материала, целесообразно иметь современное высокопроизводительное оборудование для подготовки и анализа гистологических образцов. Это автоматизированные модульные тканевые процессоры (для фиксации, дегидратации и пропитки гистологических образцов), гистоэмбеддеры (от диспенсеров и охлаждающих плат до модульных парафиновых станций, совмещающих в себе все компоненты, необходимые для процесса заключения образцов в парафин), разнообразные санные, ротационные, вибрационные компьютеризированные микротомы (для изготовления парафиновых срезов), криостаты (для замораживания и изготовления замороженных срезов), автоматические устройства для окрашивания срезов тканей и мазков, роботизированные каверслипперы (для автоматического заключения микроскопических препаратов в смолистую гистологическую среду и покрытия их покровными стеклами). Некоторые из перечисленных устройств представлены на рисунке 17.1.

Рис. 17.1. Современное автоматизированное оборудование

для изготовления гистологических препаратов:

а — карусельный гистопроцессор; б — станция для заливки парафиновых блоков; в — санный микротом; г — ротационный микротом; д — вибратом; е — автомат для окраски гистопрепаратов;

ж — автомат для заключения препаратов под покровные стекла

Лабораторная посуда: всевозможные биологические стаканчики, бюксы, мерные цилиндры, воронки, колбы, кюветы, банки и бутылки с притертыми пробками (для хранения летучих соединений), макро- и микропипетки, чашки Петри, спиртовки. Из особых баночек с притертыми пробками в специальных штативах составляются батареи для проводки образцов биологического материала через спирты возрастающей концентрации, органические растворители и расплавленные парафины, а также батареи депарафинизации и заключения при изготовлении гистологических препаратов.

Инструменты: разнообразные пинцеты, ножницы, скальпели, шпатели, препаровальные иглы, зажимы, карцанги, шприцы.

Расходные материалы: предметные и покровные стекла для изготовления гистологических препаратов, одноразовые лезвия для микротомов и криостата, различная фильтровальная бумага, швейные иглы, картон и нитки для этикетирования образцов биологического материала, стеклографы, лезвия для безопасной бритвы, а также парафин, воск, полистирол, жидкий азот и др.

Химические реактивы: спирты, ксилол, хлороформ, кислоты, щелочи, соли. Лаборатория должна быть также оснащена специальными реактивами для гистохимических (специфические красители, субстраты и кофакторы для выявления активности ферментов), иммуногистохимических (сыворотки, антисыворотки с антителами и др.) и электронно-микроскопических исследований. Некоторые реактивы следует хранить в холодильнике (при +4 °C) или даже в морозильной камере (при —20 °C). Количество наименований необходимых для работы реактивов может достигать нескольких сотен или даже тысяч. Реактивы и расходные материалы для заказа можно найти в соответствующих каталогах фирм-производителей («Sigma», «Aldrich», «Fluka» и др.) или отечественных фирм-поставщиков («Хим-Хром», «5 океанов», «Анализ-Х» и др.).

Гистологические красители: основные, кислые, нейтральные. Среди основных гистологических красителей наиболее часто используются гематоксилин, азур, толуидиновый и метиленовый синий, среди кислых — эозин. Для гистохимических ис следований применяют также особые красители, избирательно окрашивающие в срезах определенные химические вещества.

Микроскопы в гистологической лаборатории предпочтительно иметь с люминесцентной насадкой и цифровой фото-или видеокамерой с компьютером для оценки и архивирования получаемых микроскопических изображений гистологических препаратов. Специальные темные фотокомнаты для проявления фотопленок и печати фотографий в настоящее время становятся неактуальными в связи с переходом на цифровое микрофотографирование.

Журналы — для регистрации образцов биологического материала, поступающих в лабораторию для исследования, записи выполненных работ, ведения протоколов выполняемых исследований, учета использования сложного оборудования.

Требования безопасности труда при ведении работ в гистологической лаборатории.

• 1. В лаборатории должны находиться исправные и готовые к использованию противопожарные средства (огнетушители, песок, вода), электропроводная и водопроводная сети, вентиляционная система, аптечка для оказания первой медицинской помощи пострадавшему.
• 2. В лаборатории запрещается принимать пищу, пить и курить. Работать следует в чистых халатах, а в некоторых случаях и в резиновых перчатках. После приготовления реактивов и завершения работы обязательно мыть руки.
• 3. При работах, могущих вызвать раздражение и ожоги глаз, необходимо надевать защитные очки. Нельзя трогать и тереть глаза.
• 4. Работы с летучими и ядовитыми веществами следует проводить в вытяжном шкафу.
• 5. Нельзя пробовать реактивы на вкус и вдыхать неизвестные вещества (они могут быть ядовитыми).
• 6. При работе с приборами и аппаратами необходимо строго следовать прилагаемым инструкциям.
• 7. Во время приготовления реактивов следует соблюдать общие правила безопасности, принятые в химических лабораториях. На каждый сосуд, содержащий реактивы, сразу после

РАЗДЕЛ IV. ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА приготовления надо наклеивать этикетку с указанием названия веществ, назначения, концентрации, даты изготовления и т. д.

8. При попадании на тело концентрированной кислоты или щелочи пораженный участок следует немедленно промыть большим количеством воды, после чего (при необходимости) наложить компрессы из 1%-го раствора NaHCO₃ (при ожоге кислотами) или из 1%-го раствора СН₃СООН (при ожоге щелочами).

В гистологической лаборатории выполняют не только обычные гистологические исследования, но и гистохимические, иммуногистохимические, цитологические (исследования мазков, пунктатов, отпечатков, осадков биологических жидкостей), гематологические (исследование мазков крови и красного костного мозга), а также подготавливают образцы для электронномикроскопического исследования.

17.2. Изготовление гистологических прЕплрлтов