ОТВЕТ КЛЕТОК КРОВИ ЧЕЛОВЕКА НА ПОВРЕЖДЕНИЯ ДНК В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ПРОФЕССИОНАЛЬНЫХ ВРЕДНОСТЕЙ, ВОЗРАСТА И ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ

В результате хронического влияния мутагенов окружающей среды на клетки и организмы происходит интенсификация мутационного процесса, который затрагивает функционирование защитных и репарационных систем, снижая порог чувствительности к последующим мутагенным воздействиям, что увеличивает уровень повреждений ДНК, частоту генных и хромосомных мутаций, постепенно дестабилизирует геном и может привести к развитию патологических состояний. В главе 1 приведены доказательства существования радиационно-индуцированной геномной нестабильности и ее ассоциации с канцерогенезом и повышенной заболеваемостью. Есть теоретические и экспериментальные предпосылки считать, что хроническое воздействие химических мутагенов также способствует развитию геномной нестабильности, по крайней мере, у части экспонированных популяций. Целью дальнейших исследований была попытка выявить признаки геномной нестабильности в группах населения, контактирующего с вредными факторами среды по роду профессиональной деятельности, а также в связи с хроническими воспалительными процессами и онкологической патологией.

Группы обследования, характеристика производственной среды и метод оценки целостности генома изолированных лимфоцитов

Работа по оценке целостности генома лимфоцитов в зависимости от профессиональных вредностей организована при содействии Центра гигиены и эпидемиологии Заводского района г. Минска. Предварительно разработана документация для забора биологического материала в соответствии с международными нормами [Declaration of Helsinki, 2008]. Документация включает: 1) информированное согласие на участие в обследовании; 2) памятку добровольного участника, разъясняющую его права и цель исследования; 3) анкету участника; 4) инструкцию для медперсонала по забору и хранению образцов крови.

На базе медсанчасти ОАО «Минский автомобильный завод» (ОАО МАЗ) сформирована группа добровольцев из числа работников, обращающихся для прохождения профилактического осмотра. Забор венозной крови осуществлялся медперсоналом медсанчасти после подписания добровольцами информированного согласия и заполнения анкеты, содержащей сведения о возрасте, месте и стаже работы, вредных условиях труда, вредных привычках, перенесенных заболеваниях, приеме лекарств, рентгенологическом обследовании, при этом гарантировалась конфиденциальность полученной персональной информации. Для исследования привлекались лица, не имеющие непосредственного контакта с вредными факторами среды (группа внутреннего контроля), а также работники, подвергаемые воздействию химических и/или физических факторов (экспонированные группы).

Следует подчеркнуть, что на производстве редко встречается изолированное действие вредных факторов, обычно работник подвергается сочетанному действию факторов разной природы (физических и химических) или комбинированному влиянию факторов одной природы, чаще - химических веществ [Mirer ]. Самыми распространенными являются производственный шум и вибрация, промышленные пыли и аэрозоли. Так, при повышенном уровне шума на автомобильных предприятиях г. Минска работает приблизительно 65 %, а в условиях повышенной вибрации - около 20 % всех занятых на производстве. До 28 % работников находятся в атмосфере кремний-содержащих аэрозолей [Валькевич, Антипов, 2003; Федорович и др., 2010].

Лица из группы с преимущественным химическим загрязнением среды контактировали с вредными веществами, содержание которых в воздухе на момент анализа не превышало предельно допустимые концентрации на рабочих местах. В соответствии с Постановлением Министерства здравоохранения Республики Беларусь № 240 от 31 декабря 2008 г. они составляли не более:

  • 0,5 мг/м3 для формальдегида,
  • 5 мг/м3 для фенола и бензола,
  • 0,02 мг/м3 для хрома,
  • 0,05 мг/м3 для свинца,
  • 2 мг/м3 для диоксида кремния при его содержании в пыли от 10 до 70 % и 1 мг/ м3 при его содержании в пыли свыше 70 %.

Для всех веществ указаны среднесменные нормы [СанПиН, 2008].

Уровень шума не превышал установленные Постановлением Министерства Здравоохранения Республики Беларусь № 115 от 16 ноября 2011 г. предельные уровни шума на рабочих местах, то есть 80 дБА [СанПиН, 2011], а повышение уровня до 82-86 дБА соответствовало минимальным или средневысоким воздействиям шума по международной классификации [Concha-Barrientos, campbell-Lend rum, Steenland, 2004]. Уровень вибрации находился в пределах допустимого Постановлением Министерства Здравоохранения Республики Беларусь № 93 от 13.07.2010 г. [СанПиН, 2010].

В период проведения исследований (2008-2010 гг.) на предприятии выполнялась комплексная программа «Здоровье» по улучшению условий труда, которая предусматривала профилактику производственного травматизма, внедрение безопасных и безвредных технологий и оборудования, улучшение обеспечения работников средствами индивидуальной защиты, раннее выявление производственных опасностей с целью предупреждения травматизма и профессиональных болезней. В связи с этим оценка целостности генома с целью обнаружения случаев геномной нестабильности представляла определенный интерес, так как вносила свой вклад в реализацию программы, позволяя выделять группы риска по повышенной заболеваемости и способствуя оптимизации профилактических мероприятий.

Для оценки целостности генома лимфоцитов применялся метод ДНК-комет и описанная в предыдущей главе схема эксперимента in vitro с небольшими модификациями, а именно: для изучения процесса репарации ДНК отбор образцов клеточной суспензии для приготовления микропрепаратов осуществлялся на

О, 30, 60 и 180-й мин после обработки лимфоцитов пероксидом водорода. Уровень фоновых повреждений ДНК учитывали на 180-й мин инкубации интактных лимфоцитов. Чувствительность генома лимфоцитов к мутагенному воздействию определяли по начальному уровню Н2О2-индуцированных повреждений ДНК, т. е. сразу после мутагенного воздействия. Уровень остаточных повреждений ДНК регистрировали через 3 ч после воздействия Н2О2(на 180-й мин инкубации обработанных лимфоцитов). Эффективность репарации ДНК определяли, начиная со второй точки фиксации, однако для интерпретации результатов наиболее важен показатель, рассчитанный в конце наблюдения. Использованный подход позволял оценить генотоксичность вредных факторов производственной среды, осуществить мониторинг возможных генетических последствий для обследованных групп производственников и выявить людей с повышенной чувствительностью лимфоцитов к мутагенному воздействию in vitro и/или пониженной способностью к репарации ДНК.

Чтобы проанализировать индивидуальную чувствительность лимфоцитов, определены референтные интервалы, соответствующие норме. Для этого применяли параметрический метод 2-х о и непараметрический метод, когда в качестве границ вычисляли 5-й, 95-й либо 10-й, 90-й процентили. Оба подхода, как и другие использованные статистические методы, подробно описаны в руководствах по медицинской и биологической статистике [Bland, 2000; Реброва, 2002].

 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ ОРИГИНАЛ   След >