Оценка целостности генома лимфоцитов у потенциальных гетерозиготных носителей мутаций, ответственных за синдром Ниймеген, анемию Фанкони и другие СХН

Указанную группу составили родственники детей с установленным диагнозом СХН (10 человек) и неподтвержденным диагнозом СХН (10 человек). В первую подгруппу вошли родители детей с диагнозом СН и АФ, а также недифференцированным СХН. Анализ частоты аберраций хромосом (АХ) у родителей, имеющих ребенка с СН и АФ, проводился с целью подтверждения гетерозиготного носительства мутаций, приводящих к развитию данных заболеваний. Частота спонтанных аберраций хромосом в этой подгруппе в среднем достоверно превышала контроль (табл. 3.1): 6,60±1,06 % и 2,50±0,32 %, соответственно. Цитогенетическое обследование родителей во второй подгруппе также выявило достоверное превышение средней частоты АХ (6,00±1,15 %) по сравнению с контролем. Кариотип и спектр перестроек в обеих подгруппах был в норме.

Параллельно у всех лиц оценено состояние генома с помощью метода ДНК-комет. Из данных, представленных в табл. 3.3, видно, что на фоне их вариабельности, о чем свидетельствует также и рис. 3.4, частота эндогенных повреждений ДНК в обеих подгруппах родственников имеет тенденцию к повышению по сравнению с контролем.

В группе родителей детей с установленным СХН (условно -облигатные гетерозиготные носители) наблюдаемые различия по эндогенным повреждениям (более чем в 2 раза) статистически достоверны (р < 0,05). Частоты экзогенных повреждений ДНК на 180-й мин также существенно выше, чем у здоровых индивидуумов.

Следует подчеркнуть, что у облигатных гетерозиготных носителей мутации, ассоциированной с СН, средняя по группе частота спонтанных аберраций хромосом (5,57±0,72%) превышает контрольные значения, что согласуется с существенным увеличением уровня эндогенных и экзогенных повреждений ДНК к концу инкубации лимфоцитов [Savina et al., 2012]. Подобная тенденция прослеживается и в семьях, имеющих детей с неподтвержденным диагнозом СХН, однако из-за большой вариабельности признаков достоверность наблюдаемых различий доказать не удалось. Незначительное понижение эффективности репарации поврежденной ДНК в обеих группах родственников также не достигло уровня статистической значимости.

Таблица 3.3. Ответ лимфоцитов на повреждения ДНК у потенциальных гетерозиготных носителей мутаций, ответственных за СХН

Показатель

Время фиксации, (мин)

Контроль

Группа родителей детей

с установленным СХН

с неподтвержденым СХН

Эндогенные повреждения ДНК (а. и.)

180

9,13±0,79

21,89±1,84*

14,11±4,42

Н2О2- индуцированные повреждения ДНК (а. и.)

0

85,63±4,38

91,20±6,14

122,10±14,70

30

31,69±3,19

39,80±4,43

46,20±8,01

60

22,69±2,05

24,29±2,32

37,90±7,55

180

13,32±1,07

23,50±3,14*

21,75±6,85

Эффективность репарации ДНК (%)

30

64,13±2,60

55,58±5,17

60,53±5,27

180

83,19±1,45

74,29±4,15

76,68±9,94

*Существенные различия между группой пациентов и контролем при р < 0,05.

Таким образом, с помощью метода ДНК-комет у родителей пациентов с СХН выявлены повышенные по сравнению с контролем уровни эндогенных повреждений ДНК и остаточных повреждений ДНК, индуцированных in vitro пероксидом водорода. Обнаружение признаков геномной нестабильности цитогенетическими

РП-АХ РП-К-180 РП-Н202-180

Рис. 3.4. Показатели целостности генома в группах потенциальных гетерозиготных носителей мутаций, ответственных за СХН, по сравнению с контролем: (а) у родителей детей с неподтвержденным (PH) и (б) установленным диагнозом СХН (РП). АХ - частота аберраций хромосом; К - контроль; К-180 - уровень эндогенных повреждений ДНК на 180-й мин инкубации клеток; Н,О,-180 -остаточный уровень индуцированных повреждений ДНК. Mean - среднее значение; SE - стандартная ошибка; SD - стандартное отклонение

методами и с помощью метода ДНК-комет у этой категории пациентов имеет принципиальное значение, так как указывает на гетерозиготное носительство мутаций, ассоциированных с СХН, что сопряжено с повышенным риском канцерогенеза и имеет принципиальное значение при генетическом консультировании семьи.

 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ ОРИГИНАЛ   След >