ДИАГНОСТИКА ГЕНОМНОЙ НЕСТАБИЛЬНОСТИ В КЛЕТКАХ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА ПРИ ВРОЖДЕННОЙ И НАСЛЕДСТВЕННОЙ ПАТОЛОГИИ

Формирование групп обследования

Для исследования целостности генома лимфоцитов периферической крови при наследственной и врожденной патологии были сформированы следующие группы:

• 1) Контрольная группа (35 человек), состоящая из волонтеров - жителей г. Минска, по роду деятельности не связанных с профессиональными вредностями, без вредных привычек и острых либо хронических заболеваний, не подвергавшихся в ближайшие месяцы рентгенологическому обследованию и лечению.
• 2) Пациенты РНПЦ «Мать и дитя»:

дети с предполагаемым диагнозом «синдром хромосомной нестабильности» (СХН);

дети с множественными врожденными пороками развития (МВПР);

члены семей, имеющих детей с предполагаемым диагнозом СХН и МВПР.

Клинико-цитогенетическое обследование лиц для установления диагноза проведено сотрудниками РНПЦ «Мать и дитя» в соответствии с «Комплексной программой клинико-цитогенетической диагностики наиболее частых синдромов хромосомной нестабильности» (2006). При этом учитывалось наличие основных клинических признаков болезней, относящихся к группе СХН. Такие признаки, как иммунодефицитное состояние, частые респираторные инфекции, микроцефалия, задержка физического и психомоторного развития, пигментированные пятна на коже, повышенная частота злокачественных заболеваний лимфоретикулярной системы, давали основание предполагать высокий риск выявления у пациента синдрома Ниймеген (СН). Пациенты с клинически предполагаемым диагнозом СН проходили цитогенетическое обследование, включающее: 1) стандартный анализ кариотипа (GTG-метод); 2) анализ частоты и спектра спонтанных неспецифических аберраций хромосом; 3) анализ частоты и спектра маркерных аберраций хромосом. Диагностически значимыми для постановки диагноза СН являлись сайт-специфические стабильные перестройки хромосом 7 и 14 [Политыко и др., 2008 а].

Такие признаки, как бледность кожных и слизистых покровов, апластическая анемия, пониженный уровень гемоглобина, тромбоцитопения, систолический шум в области сердца, предполагали высокий риск выявления у пациента анемии Фанкони (АФ). К клиническим проявлениям АФ также относятся пороки развития (отсутствие большого пальца руки, лучевой кости, микроцефалия, аномалии почек), нарушение пигментации кожи («кофейные пятна», очаги гипо- или гиперпигментации) и др. Для цитогенетического подтверждения диагноза АФ выполнялись: 1) стандартный анализ кариотипа (GTG-метод); 2) анализ частоты и спектра спонтанных неспецифических аберраций хромосом; 3) анализ чувствительности хромосом к бифункциональному алкилирующему агенту митомициту С (ММС) в соответствии с рекомендациями А. Д. Ауэрбах [Auerbach, 1993] и других авторов, что обобщено в Инструкции по применению «Метод цитогенетической диагностики анемии Фанкони» [Политыко и др., 2008 б].

Родители и сибсы детей с предполагаемым диагнозом СХН также обследованы с целью выявления хромосомной/геномной нестабильности, указывающей на возможное гетерозиготное носительство соответствующих мутаций.

При обследовании детей с МВПР учитывались такие клинические признаки, как задержка физического и психомоторного развития, надклапанный стеноз аорты, легочной артерии, подклапанный стеноз легочной артерии, коарктация аорты, тетрада Фалло, пролапс митрального клапана, дефект трикуспидального клапана, дефект межпредсердной перегородки, дефект межжелудочковой перегородки, черепно-лицевые дисморфии, звездчатая радужка.

Сочетание определенных фенотипических признаков у этих пациентов позволяло предполагать наличие синдрома Вильямса-Бойрена (СВБ) или синдрома ДиДжорджи, для подтверждения которых использовался молекулярно-цитогенетический анализ (метод FISH).

Всего обследовано 73 пациента, для каждого из которых определен кариотип, проанализированы частоты и спектр аберраций хромосом (АХ), наличие/отсутствие диагностически значимых цитогенетических и молекулярно-цитогенетических маркеров. На основании данных цитогенетического и клинического обследования сформированы следующие группы риска по геномной нестабильности:

• 1. Пациенты с установленным диагнозом СХН (7 человек). Эта группа включала пять детей с синдромом Ниймеген (СН), одного пациента с анемией Фанкони (АФ) и одного ребенка с недифференцированным СХН.
• 2. Пациенты с установленным диагнозом синдром Вильям-са-Бойрена (12 человек).
• 3. Пациенты с синдромом микроделеции 22qll.2 (4 человека).
• 4. Группа пациентов с МВПР (30 человек), которая включала подгруппы пациентов с неустановленным генетическим дефектом (25 человек) и пациентов с клинически предполагаемым, но не подтвердившимся СХН (5 человек).
• 5. Близкие родственники детей с установленным диагнозом СХН (10 человек) и неподтвержденным диагнозом СХН (10 человек).