2.1. Культивирование микроорганизмов

2.1.1. Терминология

Выращивание микроорганизмов на питательных средах называют культивированием (от лат. cultus - выращивание), а развившиеся в результате микроорганизмы - культурой. При развитии в жидкой среде культуры образуют суспензию, осадок или пленку, при развитии на плотной среде - колонии. Культура может быть чистой - содержать потомство клетки только одного вида и накопительной - состоять преимущественно из клеток одного вида микроорганизмов.

Внесение клеток микроорганизмов или какого-либо исследуемого материала (образца почвы, пробы воды) в стерильную питательную среду для получения чистой или накопительной культуры называют посевом. Перенесение уже выращенных клеток из одной среды в другую (стерильную) называют пересевом или пассированием (от лат. passus - чередование).

Обычно микроорганизмы выращивают при определенной постоянной температуре в термостатах (деревянных или металлических шкафах) или термостатных комнатах. В тех и других постоянная температура поддерживается с помощью терморегуляторов.

Культивирование при определенной температуре называется инкубацией или инкубированием (от лат. incubatio - выращивание, высиживание птенцов).

Выращивают микроорганизмы в стеклянной посуде: пробирках, колбах или чашках Петри. Для этого стеклянную посуду, не бывшую в употреблении, очищают от щелочи кипячением в растворе, содержащем К2СГ2О7 (6 %) и концентрированную H2SO4 (6 %).

В пробирках микроорганизмы культивируют как в жидких, так и на плотных средах. Жидкой средой для аэробных культур заполняют обычно 1/3 пробирки, для анаэробных - 2/3. Если плотная среда в пробирках предназначена для последующего выращивания микроорганизмов, при подготовке к стерилизации ее наливают на 1/3-1/4 объема пробирок.

После стерилизации пробирки с еще не застывшей средой раскладывают на ровной поверхности стола в наклонном (под небольшим углом) положении для получения скошенной поверхности агара. Это так называемые косяки - косые или скошенные среды.

Плотная среда, застывшая при вертикальном положении пробирки, называется столбиком. Столбики питательной среды, занимающей 1/3-V2 объема пробирки, используют для посева культуры уколом. Столбики питательной среды, занимающие 2/3 объема пробирки, после стерилизации применяют для заливки стерильных чашек Петри, предназначенных для микробиологических посевов.

Пробирки со средами и культурами во время работы устанавливают в штативы; пробирки со средами, подготовленными к стерилизации, помещают в проволочные корзины или металлические ведра с отверстиями; пробирки с культурами при инкубации или хранении - в картонные коробки.

При культивировании микроорганизмов в колбах используют только жидкие питательные среды. Для аэробных микроорганизмов среду наливают тонким слоем (например, 30 мл в колбы Эрленмейера на 100 мл), для анаэробных микроорганизмов колбу заполняют на 2/3 объема.

В чашках Петри микроорганизмы культивируют лишь на плотных средах. Высота этой посуды - около 1,5 см, диаметр - 8-10 см, причем диаметр верхней чашки (она служит крышкой) несколько больше диаметра нижней.

Для работы с микроорганизмами используют специальные бактериологические иглы, петли и шпатели. Их изготовляют из платиновой проволоки, которую закрепляют в специальных металлических

25 держателях или впаивают в стеклянные палочки. Толщина игл и петель не должна превышать 0,5 мм, толщина шпателя может быть 1,5 мм и более.

При посевах и пересевах культур микроорганизмов из колоний, выросших на плотных средах, применяют иглы или шпатели. Последние используют и для взятия клеток микроорганизмов из колоний, врастающих в субстрат. Суспензии микроорганизмов берут петлей.

При приготовлении препаратов микроорганизмов предметные стекла удерживают на весу пинцетами Корпэ или специальными пинцетами-держателями. Сушить препараты целесообразно на верхнем ярусе сушильного металлического столика Коха. Промывать их удобно на приспособлениях-перекладинах или на так называемых препаратодер-жателях - параллельно расположенных стеклянных палочках, соединенных резиновыми трубками (длина палочек 20-30 см, трубок 15-20 см). Палочки устанавливают над фарфоровыми чашками или ваннами.

2.1.2. Техника посева

Посев (или пересев) всегда проводят вблизи горелки. При посеве клеток микроорганизмов из пробирки в пробирку обе пробирки (одну - с культурой, другую - со стерильной питательной средой) берут в левую руку. Одну пробирку зажимают между указательным и средним пальцами (первая пробирка). Нижний конец ее свободно лежит на большом пальце (с его левой стороны). Вторую пробирку зажимают между средним и безымянным пальцами. Она должна лежать параллельно первой. Ее нижний конец располагается с правой стороны большого пальца. Большой палец, находясь между пробирками, должен быть в естественном, ненапряженном состоянии и слегка удерживать пробирки в параллельном по отношению друг к другу положении.

При взятии мазка пробирки должны находиться в наклонном положении, гарантирующем стерильность культуры. При вертикальном расположении пробирок возможно попадание из воздуха посторонних клеток микроорганизмов.

В пламени горелки тщательно обжигают бактериологическую иглу (петлю), держа се в правой руке в отвесном положении. Мизинцем правой руки вынимают из второй пробирки ватную пробку и зажимают ее между мизинцем и ладонью. Пробку первой пробирки зажимают между безымянным и средним пальцами правой руки. Снова слегка обжигают иглу и вводят ее в пробирку с культурой. Платино26 вая игла остывает очень быстро. Легким прикосновением ее к колонии микроорганизмов берут небольшое количество микробной массы и переносят во вторую пробирку.

При высеве в плотную скошенную среду иглой с культурой легким движением, не повреждая среды, проводят прямую или волнообразную черту по ее поверхности - посев штрихом.

При посеве в столбик питательной среды иглу вводят в толщу ее центральной части - посев уколом. При посеве в жидкую среду (или из жидкой среды) лишь слегка наклоняют пробирки, чтобы избежать смачивания пробок и краев пробирок.

Пробки, перед тем как ими закрыть пробирки, обжигают в пламени. Удобнее сначала закрыть первую пробирку, а затем - вторую.

 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ ОРИГИНАЛ   След >