Определение выживаемости клеток/п vitro

Метод оценки радиочувствительности, основанный на утере способности клетки к клонообразованию, был разработан в 1956 г. Т.Т. Паком и Ф. Маркусом из США на примере клеток карциномы шейки матки человека линии HeLa (Puck Т.Т., Marcus P.I. // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 1955. Vol. 4. P. 432—427; Puck T.T., Marcus P. I. & Cieciura S.J. J. // Exp. Med. 1956. Vol. 103. P. 273—283).

По мнению С.П. Ярмоненко «.Этот метод является «золотым стандартом» количественной радиобиологии, с которым сравнивают данные других методов оценки».

Идея определения клоногенности позднее была применена к тканям in vivo, что позволило определить радиочувствительность клеток костного мозга, эпителия кожи и кишечника и клеток некоторых других тканей.

Методика используется для любых типов культур клеток: растущих прикрепленными к стенке культурального сосуда (в монослое), в культуральной среде (в суспензии), введенных животным и пр.

Полученную суспензию разбивают до одиночных клеток, подсчитывают их концентрацию и рассевают клетки по чашкам Петри таким образом, чтобы общее число колоний, выросших в каждом опыте, позволяло получить статистически значимый результат. Обычно для каждой экспериментальной точки должно быть подсчитано около 400 колоний, что дает оценку числа выросших колоний с погрешностью в 5 %. Чтобы такое количество колоний могло расти, не мешая одна другой, берут по несколько чашек Петри для одной точки. Чем больше доза излучения, тем больше клеток сеют на чашку.

Вероятность выживания клеток подчиняется закону распределения Пуассона. Точность определения вероятности событий, подчиняющихся такому распределению, устанавливается только числом подсчитанных событий — в данном случае выросших колоний, а не числом посеянных клеток, числом взятых в опыт чашек Петри и т.п.

Выживаемость при каждой дозе излучения определяют как отношение числа колоний, выросших в облученных чашках, к числу колоний (число клеток в которых достигает 50), выросших в контрольном опыте, с учетом того, что в опыте по указанной выше причине высевают больше клеток. Клетки стабильных клеточных линий в нормальных условиях способны к образованию колоний с эффективностью свыше 90 %.

 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ ОРИГИНАЛ   След >