Выделение готового продукта

Отделение термолабильных белков

Лектин относится к термостабильным белкам, и для облегчения дальнейших стадий выделения и повышения выхода целевого продукта проводят прогрев культуральной жидкости до 70 °С на протяжении 30 мин с последующим ее охлаждением до 15 °С. Это приводит к денатурации и коагуляции термолабильных белков с выпадением их в осадок.

Отделение биомассы

Выращенную в ферментере, прогретую и затем охлажденную (как описано выше) биомассу центрифугируют в проточной центрифуге, отделяя ее с осадком термолабильных белков от жидкости при скорости вращения ротора 15 000 об./мин. Скорость протока составляет порядка 200 л/час. Полученный в результате осадок биомассы и термолабильных белков отбрасывают, а супернатант культуральной жидкости используют для выделения из нее лектинов.

Концентрирование

Супернатант помещают в вакуум-выпарную установку, где его концентрируют, проводя упаривание при остаточном давлении не более 0,8 кг/см2 до 5-кратного уменьшения его объема.

Ультрафильтрация

Концентрат подают на ультрафильтрационную установку с целью выделения целевого продукта. Выделение проводят в непрерывном тангенциальном потоке с использованием двух мембран с пределами отсечения 10 и 100 кДа соответственно. Отбирают среднюю фракцию, которая представляет собой концентрированный раствор лектинов, освобожденный от низкомолекулярных (менее 10 кДа) и от высокомолекулярных (свыше 100 кДа) примесей.

Стерилизующая фильтрация

Очищенный концентрат лектинов подвергают стерилизующей фильтрации на мембранных фильтрационных установках.

Расфасовка

Стерильный жидкий препарат лектина разливают в стерильные флаконы заданного объема при соблюдении правил асептики.

Высушивание

Флаконы с стерильным жидким препаратом помещают в установку для лиофильного высушивания туннельного типа, где проводят ли- офилизацию препарата методом сублимирования замороженной жидкости. Длительность высушивания — около 24 ч. Установка для высушивания должна отвечать требованиям к оборудованию асептических производств.

Упаковка

Высушенный продукт в флаконах герметично укупоривают и пакуют в транспортную тару.

Контроль конечного продукта

Определение внешнего вида. Внешний вид определяют визуально. Определение гемагглютинирующей активности. Определение ге- магглютинирующей активности производится в планшетах для иммунологических реакций с ГГ-образной формой лунок методом серийных разведений.

Определение специфичности к Ы-ацетилнейраминовой кислоте. Специфичность к ]М-ацетилнейраминовой кислоте определяют в планшетах для иммунологических реакций с и-образной формой лунок методом торможения реакции гемагглюцинации 1М-ацетилнейраминовой кислотой.

Литература

  • 1. Подгорский В.С., Коваленко Э.А., Симоненко И.А. Лектины бактерий. Киев: Наукова думка, 1992. 204 с.
  • 2. Корсун В.Ф., Лахтин В.М., Коре у н Е.В., Мицконас А. Фитолектины. М.: Практическая медицина, 2007. 288 с.
 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ ОРИГИНАЛ   След >