Технология промышленного производства церулоплазмина
Большинство методов выделения церулоплазмина основаны на ионообменной хроматографии с использованием анионообменных сорбентов в кислых средах. Российская компания ФГУП НПО «Микроген» (г. Москва) лечебный препарат церулоплазмина получает из осадка IV-1 донорской плазмы (рис. 12.3).
На стадиях процесса осадок гомогенизируют и растворяют в буферном растворе с ионной силой, не превышающей 0,1 М, и pH, равном 6,0. Нерастворимые примеси отделяют центрифугированием и в раствор добавляют DEAE-Sephadex А-50.
Рис. 12.3. Принципиальная технологическая схема получения препарата церулоплазмина
Белки, не связавшиеся с сорбентом, отмывают буферным раствором, содержащим 0,1 М NaCl, а целевой белок элюируют 1,5 М раствором хлорида натрия. Очистку элюата от липопротеинов производят путем снижения pH раствора до 5,2 и добавлением этилового спирта и хлороформа до концентрации 25% и 3% соответственно. Выпавший осадок отделяют центрифугированием, а церулоплазмин переосаждают холодным этанолом при t = -15 °С. Затем церулоплазмин растворяют в формулирующем буфере, диализуют от остатков спирта и пастеризуют в жидком виде в течение 10 ч при t = 60 °С.
Пастеризованный препарат с концентрацией с = 50 мг/мл стерильно фильтруют, разливают порциями по 2 мл и лиофилизуют. Цветовой показатель полученного церулоплазмина ?>в10/?>280, характеризующий его степень очистки (где D — оптическая плотность раствора при длинах волн 610 и 280 нм), достигает 0,039 при максимально возможной величине 0,04. Препарат на 98% состоит из а-глобулина и на 2% из р-глобулинов; у-глобулины и альбумин отсутствуют.
Добавление в формулирующий буфер маннитола позволило создать лекарственую форму препарата «Церулоплазмин», в которой практически не наблюдается агрегирование и понижение ферментативной активности в течение всего допустимого срока хранения.
Применение препаратов церулоплазмина
Церулоплазмин для медицинских целей выпускают в виде лиофи- лизированного аморфного порошка или пористой массы голубого цвета (голубой оттенок обусловлен содержащимися в гликопротеиде ионами меди).
В качестве лекарственного средства церулоплазмин применяют для стимуляции гемопоэза, уменьшения интоксикации и иммунологической коррекции в комплексной терапии онкологических больных; во время подготовки к операции ослабленных больных с анемией, истощением, интоксикацией; в раннем послеоперационном периоде при массивной кровопотере во время хирургического вмешательства и при гнойно-септических осложнениях; при химиотерапии онкологических больных, в том числе пациентов с гемобластозами при нерезко выраженной интоксикации. Церулоплазмин также используют в комплексной терапии больных острым и хроническим остеомиелитом.
