Меню
Главная
Авторизация/Регистрация
 
Главная arrow Экология arrow Контроль безопасности и качества продуктов питания и товаров детского ассортимента: практическое руководство

5.3.1.1. Афлатоксин В1 (АТ-В,), зеараленон (ЗОН), дезоксиниваленол (ДОН) и Т-2 токсин (Т-2)

Способ подготовки проб

Определяемые микотоксины извлекают экстрагентом из пробы при соотношении масса пробы — объем экстрагента 1:5. При определении афлаток- сина Bi и зеараленона проводят очистку водно-ацетонитрильного экстракта на патроне Диапак А-3, концентрируют микотоксины на патроне Диапак П-3, высушивают от остатков воды и после упаривания и перерастворения проводят окончательную очистку на патроне Диапак Н (Диапак С — при анализе кукурузы и продуктов из нее). Фракционным элюированием получают две фракции, содержащие афлатоксин В( и зеараленон, готовые к хроматографическому анализу.

При определении дезоксиниваленола и Т-2 токсина проводят предварительную очистку водно-ацетонитрильного экстракта на патроне Диапак АУ-3 и концентрируют упариванием досуха. После перерастворения проводят окончательную очистку на патроне Диапак Н. Фракционным элюированием получают две фракции, содержащие дезоксиниваленол и Т-2 токсин, готовые к хроматографическому анализу.

Для проверки правильности проведения пробоподготовки и уточнения степени извлечения микотоксинов проводят анализ пробы методом стандартной добавки в исходный экстракт. Основные характеристики пробоподготовки методом твердофазной экстракции приведены в табл. 1.

Таблица 1. Основные характеристики пробоподготовок

Микотоксин

Время пробоподготовки, мин

Степень извлечения,%

Относительное среднее квадратичное отклонение, %

Афлатоксин В]

120

75

20

Зеараленон

120

70

20

Дезоксиниваленол

90

85

10

Т-2 токсин

90

85

10

Подготовка концентрирующих патронов

Патроны Диапак представляют собой пластиковую колонку, содержащую 1 или 3 см3 герметично упакованного сорбента.

Концентрирующий патрон Диапак А-3

Вскрыть выходную линию патрона Диапак А-3, сняв полимерную заглушку. Установить патрон в вертикальном положении узким концом вниз в подходящее устройство для вакуумирования и сбора элюата. Осторожно открыть полимерную крышку патрона, сформировать ровный горизонтальный верхний слой сорбента легким постукиванием по патрону и зафиксировать его с помощью небольшого ватного тампона. Подключить вакуум к устройству для вакуумирования и обеспечить подачу вакуума к патрону.

Концентрирующий патрон Диапак А-3 одноразового применения и регенерации не подлежит.

Концентрирующий патрон Диапак АУ-3

Подготовка концентрирующего патрона Диапак АУ-3 (см. выше). Концентрирующий патрон Диапак АУ-3 одноразового применения и регенерации не подлежит.

Концентрирующий патрон Диапак П-3

Установить патрон Диапак П-3 вертикально в подходящее устройство для вакуумирования и открыть верхнюю крышку. Суспендировать сорбент при перемешивании стеклянной палочкой в 10 см3 бензола, дать отстояться сорбенту и пропустить при слабом вакууме, не допуская попадания воздуха на сорбент, последовательно по 10 см3 бензола и ацетона.

Сохранив слой ацетона около 2 см, ввести пористый полимерный фильтр (имеется в комплекте) и уплотнить его палочкой по верхнему слою сорбента. Затем пропустить оставшийся ацетон и последовательно по 10 см3 экстрагента* и смеси экстрагент — вода (1:1), не допуская попадания воздуха на сорбент со скоростью 2—3 капли в секунду.

Сохранив слой последнего элюента около 2 см, отключить вакуум и заглушить патрон сначала верхней крышкой, а затем (после прекращения скапывания) и нижней заглушкой. Подготовленный таким образом патрон может храниться в течение рабочего дня, а при случайном пересыхании приводится в рабочее состояние прокачиванием 10 см3 смеси экстрагент — вода (1:1).

Концентрирующий патрон Диапак П-3 многоразового применения и подлежит регенерации по схеме, как указано выше, после проведения про- боподготовки.

Концентрирующий патрон Диапак Н

Снять с патрона Диапак Н заглушки, пропустить через него с помощью шприца 5 см3 бензола и заглушить оба конца патрона. Подготовленный таким образом патрон может храниться в течение суток при температуре не выше 25 °С.

Концентрирующий патрон Диапак Н многоразового применения и подлежит регенерации по следующим схемам после проведения пробопод- готовки:

  • • после подготовки пробы ДТ последовательно пропустить через патрон по 5 см3 этилового спирта, ацетона и бензола;
  • • после подготовки пробы АЗ последовательно пропустить через патрон по 5 см3 ацетона и бензола.

Концентрирующий патрон Диапак С

Снять с патрона Диапак С заглушки, пропустить через него с помощью шприца 4 см3 бензола и заглушить оба конца патрона. Подготовленный таким образом патрон может храниться в течение суток при температуре не выше 25 °С.

* Экстрагент — 84%-ный ацетонитрил в воде; для этого 840 см3 ацетонитрила доводят до 1 л водой либо перегонкой водно-ацетонитрильной смеси (1:4).

Концентрирующий патрон Диапак С одноразового применения и регенерации нс подлежит.

Экстракция микотоксинов

Зерно и зернопродукты

25 г размолотой пробы перенести в коническую колбу и залить 125 см3 экстрагента. Провести интенсивное перемешивание содержимого колбы в течение 30 мин. Экстракт отфильтровать через бумажный фильтр «синяя лента».

Орехи и семена масличных культур

25 г размолотой пробы перенести в колбу Эрленмейера, добавить 125 см3 экстрагента и 40 см3 гексана. Провести интенсивное перемешивание содержимого колбы в течение 30 мин. После перемешивания внести в экстракт 1 г хлорида натрия и продолжить перемешивание в течение 5 мин. Отфильтровать через бумажный фильтр «синяя лента». Отфильтрованный экстракт перенести в делительную воронку и после расслоения раствора собрать нижний водно-ацетонитрильный слой. Ацетонитрильный экстракт обезжирить 25 см3 гексана в делительной воронке вместимостью 250 см3.

Экстракт перенести в делительную воронку, добавить еще 25 см3 гептана и интенсивно перемешать. После расслоения собрать нижний водноацетонитрильный экстракт.

Масло растительное

25 г масла перенести в колбу Эрленмейера, добавить 40 см3 гексана и 125 см3 экстрагента. Провести интенсивное перемешивание содержимого колбы в течение 30 мин. После перемешивания в экстракт внести 0,2 г хлористого натрия и продолжить перемешивание в течение 3—5 мин. Экстракт перенести в делительную воронку и после расслоения смеси собрать нижний водно-ацетонитрильный слой. Ацетонитрильный экстракт обезжирить 25 см3 гексана или гептана или петролейного эфира в делительной воронке вместимостью 250 см3.

Экстракт перенести в делительную воронку, добавить еще 25 см3 гептана и интенсивно перемешать. После расслоения собрать нижний водноацетонитрильный экстракт.

Очистка и концентрирование проб

Предварительная очистка и концентрирование пробы

25 см3 обезжиренного экстракта пропустить через патрон Диапак А-3 со

скоростью 2—3 капли в секунду и отобрать 20 см3 элюата.

Полученный элюат объемом 20 см3 разбавить равным объемом воды. Полученный раствор пропустить через патрон Диапак П-3 со скоростью 1—2 капли в секунду, после чего патрон промыть 5 см3 воды и продуть воздухом в течение 1 мин.

Целевую фракцию элюировать с патрона Диапак П-3 последовательно 7 см3 ацетонитрила и 7 см3 33%-ного бензола в ацетонитриле со скоростью

1—2 капли в секунду. Собранный элюат пропустить через слой безводного сульфата натрия (Юг) самотеком. Колбу ополоснуть 2 см3 33%-ного бензола в ацетонитриле и содержимое перенести на тот же слой безводного сульфата натрия. Промыть сульфат натрия 3 см3 33%-ного бензола в ацетонитриле. Высушенный фильтрат упарить досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С и немедленно перерастворить в 0,5 см3 бензола.

Окончательная очистка на патроне Диапак Н (вариант 1)

Бензольный раствор нанести на предварительно кондиционированный патрон Диапак Н. Колбу, содержащую сухой остаток, обмыть еще 2 раза по 0,5 см3 бензола и последовательно нанести растворы на патрон Диапак Н. Все смывы с патрона отбросить.

Зеараленон элюировать с патрона Диапак Н 4 см3 2%-ной уксусной кислоты в бензоле и упарить досуха (до исчезновения запаха уксусной кислоты) на ротационном испарителе при температуре не выше 50 °С (Проба 3). Сухой остаток немедленно перерастворить в растворителе, соответствующем конечному хроматографическому определению.

Затем элюировать афлатоксин Bi 5 см3 20%-ного ацетонитрила в бензоле с патрона и упарить досуха в токе азота при температуре не выше 40 °С (Проба А). Сухой остаток немедленно перерастворить в растворителе, соответствующем конечному хроматографическому определению.

Эквивалент массы пробы, взятой на анализ афлатоксина В[, Мпр, — 4 г.

Эквивалент массы пробы, взятой на анализ зеараленона, Мпр, — 4 г.

Окончательная очистка на патроне Диапак С (вариант 2)

Рекомендуется для кукурузы и продуктов из нее.

Бензольный раствор нанести на предварительно кондиционированный патрон Диапак С. Колбу, содержавшую сухой остаток, обмыть еще 2 раза по 0,5 см3 бензола и нанести растворы на патрон Диапак С при достижении верхнего фильтра патрона уровнем предыдущей порции раствора. Все смывы с патрона отбросить.

Зеараленон элюировать с патрона Диапак С 6 см3 10%-ного этилацета- та в бензоле и упарить досуха (до исчезновения запаха бензола) на ротационном испарителе при температуре не выше 50 °С (Проба 3). Сухой остаток немедленно перерастворить в растворителе, соответствующем конечному хроматографическому определению.

Затем через патрон Диапак С последовательно пропустить 3 см3 5%-ной уксусной кислоты в бензоле и 4 см3 25%-ного гексана в эфире. Все элюаты отбросить. Афлатоксин Bi элюировать с патрона 6 см3 10%-ного ацетона в дихлорметане. Элюат упарить досуха в токе азота при температуре не выше 40 °С (Проба А). Сухой остаток немедленно перерастворить в растворителе, соответствующем конечному хроматографическому определению.

Эквивалент массы пробы, взятой на анализ афлатоксина Bj, Мпр, — 4 г.

Эквивалент массы пробы, взятой на анализ зеараленона, Мпр, — 4 г.

Предварительная очистка и концентрирование пробы

20 см3 экстракта пропустить через патрон Диапак АУ-3 со скоростью 2—3 капли в секунду. Элюат собрать. Патрон промыть 5 см3 экстрагента и отфильтровать объединенные элюаты в сердцевидную колбу, фильтр промыть 2 см3 ацетонитрила, собирая промывочную жидкость в ту же колбу. Упарить досуха на ротационном испарителе при температуре около 60—70 °С. Упаривание повторить 2—3 раза с добавлением в колбу 3—5 см3 пропанола-2 или ацетонитрила до исчезновения капель воды на стенках колбы (Проба ДТ).

Окончательная очистка на патроне Диапак Н

Пробу ДТ растворить в 0,5 см3 хлороформа и нанести на предварительно кондиционированный патрон Диапак Н. Колбу обмыть еще 2 раза по 0,5 см3 хлороформа и последовательно нанести растворы на тот же патрон, начав сбор фракций, содержащих токсин Т-2, в отгонную колбу. Завершить элюирование токсина Т-2 2 см3 хлороформа в ту же колбу. Элюат упарить досуха на ротационном испарителе при температуре 40—45 °С и перерастворить в растворителе, соответствующем конечному хроматографическому определению токсина Т-2 (Проба Т).

Дезоксиниваленол элюировать с патрона в другую отгонную колбу 6 см3 20%-ного ацетона в хлороформе. Элюат упарить досуха на ротационном испарителе при температуре 40—45 °С и перерастворить в растворителе, соответствующем конечному хроматографическому определению дезоксини- валенола (Проба Д).

Эквивалент массы пробы, взятой на анализ дезоксиниваленола, Мр, — 4 г.

Эквивалент массы пробы, взятой на анализ токсина Т-2, Мпр, — 4 г.

 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ ОРИГИНАЛ   След >
 

Популярные страницы