Методика определения остаточных количеств мезотриона в воде, почве, зеленой массе и зерне кукурузы газохроматографическим методом

Основные положения

Принцип метода

Методика основана на определении мезотриона методом газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов (ДПР, ДЭЗ) после его экстракции из объектов анализа органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением действующего вещества между несмешивающимися фазами, гидролиза мезотриона до 4-(метилсуль- фонил)-2-нитробензойной кислоты с последующим получением ее метилового эфира.

Идентификация вещества проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании кукурузы.

Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и 2.

Таблица 1. Метрологическая характеристика метода

Таблица 2. Доверительный интервал и полнота определения мезотриона в воде, почве, зеленой массе и зерне кукурузы

Реактивы, растворы, материалы и оборудование

Реактивы, материалы и растворы Мезотрион, аналитический стандарт фирмы «Сингента» (Р — 99,7%)

Азот, о.с.ч. ГОСТ 9293-74

Ацетон ГОСТ 2603-79

Ацетонитрил ТУ 6-09-3534-87

Вода бидистиллированная, деионизованная^[1] ГОСТ 7602-72

Гелий марки «А» ТУ 51-940-80

Калия гидроксид, ч.д.а. ГОСТ 24363-80

Кислота серная, концентрированная, х.ч. ГОСТ 4204-77

Кислота хлороводородная,

концентрированная, х.ч. ГОСТ 3118-77

Медь сернокислая, ч. ГОСТ 19347-84Е

Метиламин солянокислый, ч. ТУ 6-09-2088-77

Мочевина, ч.д.а. ГОСТ 6691-77

Натрия нитрит, х.ч. ГОСТ 4197-74

Натрий сернокислый, безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76

Натрий хлористый, х.ч. ГОСТ 4233-77

Толуол, х.ч. ГОСТ 5789-78

Хромовый ангидрид, ч. ГОСТ 3776-68

Этилацетат, х.ч. ГОСТ 22300-76

Эфир диэтиловый, х.ч. ГОСТ 6265-74

Приборы, аппаратура, посуда

Аппарат для встряхивания или аналогичный ТУ 64-1-1081-73

Баня водяная ТУ 46-22-603-75

Банки с крышками для экстракции

на 250 мл, полипропилен,

кат. № 3120-0250, NALGENE

Весы аналитические ВЛА-200

или аналогичные ГОСТ 34104-80Е

Весы лабораторные ГОСТ 19491-74

Виалы (пузырьки) с тефлоновыми прокладками емкостью 40 мл, кат. № Z 27,702-9, Aldrich

Водоструйный насос ГОСТ 10696-75

Воронки делительные на 250 и 500 мл ГОСТ 23336-82

Воронки для фильтрования, стеклянные ГОСТ 8613-75

Испаритель ротационный

вакуумный ИР-1М или аналогичный ТУ 25-11-917-4

Колонка капиллярная кварцевая НР-5 (Crosslinked 5% PH ME Siloxane), длина 15 м

Колбы конические плоскодонные

на 100 и 250 мл, КПШ-250 ГОСТ 10394-72

Колбы мерные на 10, 25, 50, 100 мл ГОСТ 1770-74

Концентраторы грушевидные НШ29

ЮГУ-100 (250) ГОСТ 10394-72

Микропипетки на 0,1 мл ГОСТ 1770-74

Микрошприц на 10 мкл ТУ Е-2.833.0.24

Нагревательный блок для виал Dri-Block DB-3, Tecam

Насос водоструйный ГОСТ 10696-75

Пипетки мерные на 1,0; 2,0 и 5,0 мл ГОСТ 20292-74

Пипетки пастеровские длиной 230 мм, Z 31,073-5, Aldrich

Стаканы химические на 250 мл ГОСТ 25336-82Е

Фильтры бумажные «красная лента» ТУ 6-09-1678-86

Хроматограф газовый «Кристалл 2000М» с электронно-захватным детектором (ЭЗД) с пределом детектирования по Линдану не выше 4 • 10~¹⁴ и набором приспособлений для капиллярной колонки или аналогичный

Центрифуга, или аналогичная МРТУ 42-219 - 69

Цилиндры мерные на 25, 50 и 100 мл ГОСТ 1770-74

Подготовка к определению

Подготовка и кондиционирование колонки для газожидкостной хроматографии Капиллярную колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе гелия при температуре на 20 °С ниже предельного значения для выбранной неподвижной фазы в течение 8—10 ч.

Приготовление реактивов

Приготовление реактива Джонса для гидролиза

В колбу объемом 250 мл наливают 154 мл дистиллированной воды, добавляют 14 мл концентрированной серной кислоты и 53,6 г хромового ангидрида (СгОз) и тщательно перемешивают. Хранят раствор при комнатной температуре.

Приготовление реактива А

В колбу объемом 250 мл наливают 200 мл дистиллированной воды, добавляют 14 мл концентрированной серной кислоты и 10 г сульфата меди, перемешивают до полного растворения соли. В полученный раствор добавляют 80 г сульфата натрия, перемешивают содержимое колбы 5—10 мин. Хранят при комнатной температуре.

Получение Ы-нитрозо-Т^-метилмочевины

При отсутствии готового препарата М-нитрозо-ТЧ-метилмочевины осуществляют его синтез. Все работы необходимо проводить в вытяжном шкафу! В круглодонную колбу со шлифом емкостью I л, снабженную обратным холодильником, помещают 80 г метиламина гидрохлорида и 300 г мочевины, растворяют содержимое в 400 мл воды и кипятят 3 ч с обратным холодильником на водяной бане. По истечении срока раствор в колбе охлаждают до комнатной температуры и добавляют в него 110 г нитрита натрия. Затем раствор охлаждают в бане со льдом или снегом, содержащим поваренную соль, до 0 °С. Охлажденный раствор медленно (Осторожно! Вспенивание!) при перемешивании переливают в стакан емкостью 2 л, содержащий смесь 600 г льда и 60 мл концентрированной серной кислоты, охлаждаемый снаружи смесью льда с поваренной солью, следя за тем, чтобы температура внутри стакана не поднималась выше 2 °С.

Всплывшие кристаллы нитрозометилмочевины немедленно отфильтровывают через фильтр в воронке Бюхнера под вакуумом и промывают на фильтре ледяной водой.

Внимание! Нитрозометилмочевину хранят во влажном состоянии в темной склянке с пластмассовой пробкой в морозильнике, так как под действием света и тепла она может взорваться.

Приготовление раствора диазометана

Внимание! Диазометан взрывоопасен и очень ядовит. Все работы необходимо проводить в вытяжном шкафу!

В коническую колбу на 100 мл вносят 20 мл 40%-ного раствора гидроксида калия и 50 мл диэтилового эфира, колбу помещают в баню со льдом и охлаждают до температуры 2—4 °С. В охлажденную смесь порциями при перемешивании на магнитной мешалке или стеклянной палочкой вносят

5 г нитрозометилмочевины. Реакционную смесь выдерживают на холоде 10 мин. Затем эфирный слой сливают в чистую коническую колбу емкостью 100 мл, добавляют 10—15 гранул гидроксида калия и колбу оставляют в бане со льдом или холодильнике на 2—3 ч для осушения раствора.

Раствор диазометана в эфире хранят в морозильнике в течение 1—2 сут. При хранении сосуды с раствором нельзя плотно закрывать!

Приготовление стандартных растворов

Взвешивают 50 мг мезотриона в мерной колбе на 50 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор № 1, концентрация 1 мг/мл).

Стандартный раствор № 1 можно хранить в холодильнике в течение

6 мес.

Методом последовательного разбавления готовят стандартные растворы мезотриона в ацетоне с концентрацией 0,5; 1,0; 2,0; и 5,0 мкг/мл для построения градуировочного графика.

Гидролиз стандартных растворов и проб

Из полученных стандартных растворов мезотриона отбирают по 1 мл и помещают в виалы или пузырьки с плотно закрывающимися крышками, имеющими тефлоновые прокладки. Содержимое виал высушивают в токе теплого воздуха, затем в каждый пузырек добавляют по 2 мл реактива Джонса, закрывают виалы крышками и перемешивают содержимое, обмывая стенки виал. Помещают виалы в песчаную баню или драйблок, нагретый до температуры 88—89 °С, и выдерживают их в течение 13 мин. Через 5 мин после начала гидролиза содержимое виал быстро перемешивают еще раз и продолжают гидролиз.

Внимание! При гидролизе температура не должна опускаться ниже 85 °С.

По окончании гидролиза виалы охлаждают при комнатной температуре. В каждую виалу добавляют по 10 мл денонсированной бидистиллиро- ванной воды, 2—3 г сульфата натрия и 10 мл этилацетата, плотно закрывают крышками, встряхивают содержимое виал в течение 30 с и оставляют на 5 мин для полного разделения слоев. Из верхнего слоя этилацетата пипеткой отбирают 8—9 мл и переносят в чистую виалу (Следить за тем, чтобы конец пипетки не касался нижнего слоя! Использовать каждый раз чистые пипетки!).

К отобранной порции этилацетата добавляют 2 мл реактива А (см. выше), закрывают виалу крышкой, встряхивают 20 с и оставляют на 5 мин. Из верхнего слоя отбирают 6—7 мл этилацетата, переносят в чистую виалу, добавляют 2 мл реактива А, встряхивают 30 с и оставляют на 5 мин. Затем отбирают из верхнего слоя 5 мл этилацетата и переносят в концентратор емкостью 100 мл. Этилацетат в концентраторе упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 50 °С.

При гидролизе мезотриона получают 4-(метилсульфонил)-2-нитро- бснзойную кислоту (MNI3A).

Гидролиз проб, содержащих мезотрион, проводится аналогичным образом.

Метилирование стандартных растворов и проб

Для получения метилового эфира MNBA (MNBA-Me) к сухому остатку в концентраторе добавляют 2 мл раствора диазометана в диэтиловом эфире, плотно закрывают концентратор, перемешивают содержимое, обмывая стенки концентратора, и оставляют при комнатной температуре на 30 мин. По окончании метилирования эфир из концентратора удаляют током воздуха или азота. Сухой остаток в концентраторе разводят в 5 мл толуола.

Метилирование проб, содержащих MNBA, проводится аналогичным образом.

Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика вводят в хроматограф последовательно по 1 мкл каждого из полученных четырех растворов (для каждой концентрации делают не менее 3 вводов) и измеряют высоту или площадь пиков. По полученным данным рассчитывают среднее значение высоты пика или его площади для каждой концентрации и строят график зависимости высоты пика или его площади от концентрации мезотриона в м кг/мл.

Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.79).

Пробы воды и почвы хранятся в холодильнике в закрытых бутылках и запаянных пластиковых пакетах соответственно; пробы зеленой массы кукурузы хранятся в запаянных пластиковых пакетах в замороженном виде при температуре — 18 ^[2]С. Пробы зерна кукурузы подсушивают до стандартной влажности и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре.

Почву растирают в ступке и просеивают через сито с размером отверстий 3 мм. Зерно измельчают на лабораторной мельнице, зеленую массу измельчают ножницами.

Описание определения

Вода

Отбирают 200 мл анализируемой пробы воды в стакан объемом 250 мл, подкисляют ее концентрированной хлороводородной кислотой до pH 2 при интенсивном перемешивании стеклянной палочкой или на механической мешалке и переливают пробу в делительную воронку емкостью 500 мл. Добавляют в воронку 5 г хлорида натрия, 50 мл этилацетата и встряхивают содержимое воронки в течение 1—2 мин. После разделения слоев нижний водный слой сливают в стакан емкостью 250 мл, а этилаце- тат собирают в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Водную фазу возвращают в делительную воронку и повторяют экстракцию еще два раза порциями этилацетата по 30 мл. Объединенные в концентраторе порции этилацетата выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 50 °С.

Сухой остаток растворяют в 1—2 мл ацетона, тщательно обмывают стенки концентратора и переносят раствор пастеровской пипеткой в виалу. Концентратор ополаскивают небольшими порциями ацетона еще 2 раза, собирая ацетон в ту же виалу. Из виалы ацетон удаляют током теплого воздуха^[2].

После этого сухой остаток заливают 2 мл реактива Джонса (см. выше), плотно закрывают крышками и проводят гидролиз пробы и ее метилирование, как указано выше.

По окончании метилирования эфир из концентратора удаляют током воздуха или азота. Сухой остаток в концентраторе разводят в 10 мл толуола. В хроматограф вводят 1 мкл пробы.

Почва

Экстракция. Навеску почвы 25 г помещают в пластиковую банку емкостью 250 мл, заливают 50 мл смеси ацетонитрил-вода — 1 : 1 и экстрагируют ме- зотрион в течение 30 мин на встряхивателе. По окончании встряхивания пробу центрифугируют 10 мин со скоростью 2000 об./мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в концентратор емкостью 250 мл. Экстракцию повторяют еще раз, используя 50 мл экстрагирующей смеси и встряхивая пробу в течение 30 мин, центрифугируют и отфильтровывают экстракт в тот же концентратор. Объединенный экстракт упаривают до водного остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С.

Очистка экстракта, гидролиз и метилирование. К водному остатку в концентраторе добавляют 10 мл 5%-ного бикарбоната натрия, подщелачивая раствор до pH 8, перемешивают содержимое и переносят в делительную воронку емкостью 250 мл. Концентратор обмывают 50 мл воды и сливают ее в ту же делительную воронку. К содержимому воронки добавляют 50 мл дистиллированной воды, 5 г хлорида натрия и 20 мл диэтилового эфира. Встряхивают воронку в течение 30 с, промывая водную фазу эфиром. После разделения фаз нижнюю водную фазу сливают в стакан емкостью 250 мл, а эфир отбрасывают. Водную фазу возвращают в делительную воронку и промывают 20 мл эфира еще раз. Эфирную фракцию отбрасывают.

Промытую эфиром водную фазу сливают в стакан и подкисляют ее концентрированной хлороводородной кислотой до pH 2, добавляя кислоту по каплям при интенсивном перемешивании пробы стеклянной палочкой или механической мешалкой. (Осторожно! Возможно вспенивание!)

Подкисленную водную фазу переносят в чистую делительную воронку и встряхивают, удаляя остатки СОг. После этого в делительную воронку наливают 50 мл этилацетата и реэкстрагируют мезотрион в этилацетат, встряхивая воронку 1—2 мин. После разделения фаз нижнюю водную фазу сливают в стакан емкостью 250 мл, а этилацетат собирают в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Водную фазу возвращают в делительную воронку и повторяют экстракцию еще два раза порциями этилацетата по 50 мл. Объединенные в концентраторе порции этилацетата упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 50 ^ФС.

Сухой остаток растворяют в 1—2 мл ацетона, тщательно обмывают стенки концентратора и переносят раствор пастеровской пипеткой в виалу. Концентратор ополаскивают небольшими порциями ацетона еще 2 раза, собирая ацетон в ту же виалу.

Из виалы ацетон удаляют током теплого воздуха. После этого сухой остаток заливают 2 мл реактива Джонса, виалу плотно закрывают крышкой и проводят гидролиз пробы с после-переэкстракцией продуктов гидролиза в этилацетат и ее метилирование, как указано выше.

По окончании метилирования эфир из концентратора удаляют током воздуха или азота. Сухой остаток в концентраторе разводят в 5 мл толуола.

Зеленая масса кукурузы

Навеску измельченного растительного материала 10 г помещают в пластиковую банку емкостью 250 мл, заливают 50 мл смеси ацетонитрил-вода —1:1 и экстрагируют мезотрион в течение 30 мин на встряхивателе. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в концентратор емкостью 250 мл. Экстракцию повторяют еще раз, используя 50 мл экстрагирующей смеси и встряхивая пробу в течение 30 мин. Экстракт фильтруют в тот же концентратор. Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка при температуре не выше 40 °С. (Осторожно! При интенсивном вскипании пробы возможен ее переброс в приемную колбу!)

К водному остатку в концентраторе добавляют 30 мл 5%-ного водного раствора бикарбоната натрия, подщелачивая раствор до pH 8, перемешивают содержимое и отфильтровывают через бумажный фильтр в делительную воронку емкостью 500 мл. Концентратор обмывают 50 мл дистиллированной воды и отфильтровывают ее в ту же делительную воронку. К содержимому воронки добавляют еще 100 мл дистиллированной воды, 5 г хлорида натрия и 30 мл диэтилового эфира.

Далее анализ проводят по схеме, указанной выше (при анализе почвы).

Зерно кукурузы

Навеску измельченного зерна 10 г помещают в пластиковую банку емкостью 250 мл, заливают 50 мл смеси ацетонитрил-вода — 1 : 1 и экстрагируют мезотрион, как указано выше. Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка при температуре не выше 40 °С. (Осторожно! При интенсивном вскипании пробы возможен ее переброс в приемную колбу!).

Далее анализ проводят по схеме, указанной в анализе почвы.

Условия хроматографирования

Хроматограф «Кристалл 2000М» с электронозахватным детектором (ЭЗД ⁶³Ni) с пределом детектирования по Линдану 5 х 10~¹⁴ г/см³.

Колонка капиллярная кварцевая HP-5 (Crosslinkcd 5% PH ME Siloxane), длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура 180 °С, выдержка 3 мин; нагрев колонки по 2 градуса в минуту до температуры 200 °С, выдержка 7 мин; нагрев колонки по 30 градусов в минуту до температуры 260 °С, выдержка 4 мин.

Температура испарителя 250 °С, детектора 320 °С.

Газовый режим нормальный.

Газ-носитель гелий (Г1). Тип регулятора расхода гелия — РРГ 11, линейная скорость 20 см/с, давление на входе 28,56 кПа.

Газ 2 (Г2) — гелий (продувка испарителя), расход 1 мл/мин, сброс 1 : 20. Газ 3 (ГЗ) — азот (поддув в детектор), расход во время анализа 35 мл/мин.

Продувка системы после анализа при температуре 260 °С в течение 4 мин: продувка испарителя гелием 50 мл/мин; продувка детектора азотом 65 мл/мин.

Абсолютное время удерживания мезотриона 9 мин 52 с —10 мин 05 с. Объем вводимой пробы 1 мкл.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,05—0,5 нг. Образцы, дающие пики, большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют.

Обработка результатов анализов

Содержание мезотриона в пробах воды, почвы, зеленой массе и зерне кукурузы рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле

где X — содержание мезотриона в пробе, мг/кг или мг/л; //, — высота пика образца, мм; #о — высота пика стандарта, мм; А — концентрация стандартного раствора по мезотриону, мкг/мл; V— объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; m — масса или объем анализируемого образца, г или мл, Р — содержание мезотриона в аналитическом стандарте.

Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

Разработчики

Калинин В.А., проф., к. с.-х. н., Калинина Т.С., к. с.-х. н., Довгилевич А.В.,

k. х. н., Фролова Н.С.

Московская сельскохозяйственная академия им. К. А. Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов».

Определение остаточных количеств Азоксистробина (ICIА 5504) и его геометрического изомера (R-230310) в воде, почве, в плодах огурцов, томатов, ягодах винограда, в зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии [53]

Методические указания МУК 4.1.1213-03

l. Вводная часть

Фирма-производитель: «Сингента АГ», Швейцария.

Торговое название: Амистар Ф, СК (250 г/л), ICIA 5504, AZ5504. Название действующего вещества по ИСО: Азоксистробин.

Название действующего вещества по ИЮПАК: метил(Е)-2-{2-[6-(2- цианофенокси)пиримидин-4-илокси]фенил}-3-метоксиакрилат. Структурная формула:

Эмпирическая формула: C22H17N33O5.

Молекулярная масса: 403,4.

Химически чистый Азоксистробин представляет собой бесцветное кристаллическое вещество без запаха.

Давление пара 1,1 • 10~¹³.

Температура плавления 166 °С.

Коэффициент распределения н-октанол — вода: K₀/_w = 440, lg Ро/w = 2,64.

Растворимость в воде зависит от кислотности среды и составляет при 25 °С 6,2 (pH 5,2), 6,7 (pH 7,0), 5,9 (pH 9,2) мг/л.

Растворимость в органических растворителях (г/л при 20 °С): ацетон 86, ацетонитрил 340, гексан 0,057, дихлорметан 400, метанол 20, толуол 55, этилацетат 130, н-октанол 1,40 г/л.

Азоксистробин стабилен в водных растворах при pH 3—10 при комнатной температуре, в том числе при концентрациях менее 1 мкг/кг.

Период полураспада в почве в полевых условиях от 3 до 39 дней. Основным путем разложения вещества в почве является фотолиз с образованием геометрического Z-изомера.

Краткая гигиеническая характеристика: Азоксистробин относится к малоопасным веществам по острой оральной (ЛД₅₀ крысы > 5000 мг/кг) и дермальной (ЛД50 крысы > 2000 мг/кг) токсичности, но умеренно опасным по ингаляционной (ЛД50 крысы 0,698—0,962 мг/кг) токсичности. Не обладает побочными токсикологическими эффектами, может вызвать слабое раздражение при попадании на кожу и слизистую оболочку глаз.

В России для Азоксистробина установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД — 0,003 мг/кг массы тела человека;

ПДК в воде — 0,01 мг/л;

ОДК в почве — 0,4 мг/кг;

МДУ в винограде, огурцах и томатах — 0,2 мг/кг;

ВМДУ в зерне хлебных злаков — 0,2 мг/кг.

Область применения: Азоксистробин — фунгицид из группы стробилури- нов системного и контактного действия с длительным защитным эффектом. Высокоэффективен против возбудителей ложной и мучнистой настоящей росы, в том числе против рас возбудителя, устойчивых к Металакси- лу и производным триазола. Зарегистрирован в России и странах СНГ в качестве фунгицида на томатах и огурцах открытого и защищенного грунта с нормой расхода 25 % суспензионного концентрата 0,4—0,6 л/га, а также на виноградниках с нормой расхода 0,6—0,8 л/га при 1-2-кратной обработке. Проходит регистрационные испытания на зерновых колосовых культурах с нормой расхода при двукратной обработке посевов с нормой расхода до 1,0 л препарата на гектар.

R-230310 — Z-геометрический изомер Азоксистробина.

Название действующего вещества по ИСО: метил(7)-2-{2-[6-(2-циано- фенокси)-пиримидин-4-илокси]фенил}-3-метоксиакрилат.

Структурная формула:

R-230310 представляет собой кристаллический порошок желтого цвета. Физико-химические свойства близки к таковым Азоксистробина. Основной метаболит в процессе фотолиза основного вещества. Данные по токсикологии вещества фирмой не представлены.

• [1] Бидистиллят кипятят в течение 6 ч с марганцовокислым калием, добавленным израсчета 1 г/л, и затем перегоняют.
• [2] При необходимости анализ можно прервать на данном этапе. Концентраторы иливиалы закрывают пробками и оставляют до следующего дня в холодильнике.
• [3] При необходимости анализ можно прервать на данном этапе. Концентраторы иливиалы закрывают пробками и оставляют до следующего дня в холодильнике.