Мультииммуноанализ CMIA

Возможность проведения нескольких иммуноанализов одновременно экономически целесообразна, так как это экономит и время, и реагенты. Это особенно важно для выполнения сложной диагностики, которая включает определение нескольких биохимических параметров (диагностику эндокринных болезней, тесты на фертильность, раковые маркеры, определение тироидной функции, диагностические процедуры для синдрома Дауна) [72]. Однако недостаток таких одновременно определяемых трейсеров означает то, что число мультииммуноанализов, основанных на одновременном детектировании нескольких трейсеров, остается очень ограниченным. Коммерческая система Delfia, которая использует хелаты редкоземельных элементов в качестве трейсеров и флуоресценцию с временным разрешением в качестве метода, позволяет одновременно проводить иммуноанализ двух веществ [73, 74], и даже иммуноанализ четырех веществ с использованием четырех хелатов [Eu(III), Tb(III), Sm(III) и Dy(III)] [75]. Это уникальный пример, опубликованный в литературе. Металлокарбонильные метки с характеристическими полосами поглощения, которые различны для каждого трейсера, дают другую возможность для одновременного мультииммуноанализа нескольких аналитов в одном образце. Пример иммуноанализа для определения двух веществ был опубликован для случая смеси двух антиэпилептиков - карбамазепина и ди- фенилгидантоина с использованием смеси трейсеров 33 и 24 [76]. Так как

ИК-спектр смеси трех трейсеров 33, 16 и 24. (Данные из работы [77])

Рис. 8.9. ИК-спектр смеси трех трейсеров 33, 16 и 24. (Данные из работы [77])

Суперпозиция (наложение) градуировочных графиков для определения карбамазепина в моно- и тройном иммуноанализе CMIA. (Данные из работы [77])

Рис. 8.10. Суперпозиция (наложение) градуировочных графиков для определения карбамазепина в моно- и тройном иммуноанализе CMIA. (Данные из работы [77])

полосы в ИК-спектре этих двух трейсеров не перекрываются (см. рис. 8.6), количественное определение сводится к простому измерению высоты полосы при 2057 см"1 для трейсера 33 и полосы при 1971 см"1 для трейсера 24. Одновременный тройной иммуноанализ для трех антиэпилептиков (карбамазепина, фенобарбитала и дифенилгидантоина) был также описан [77]. В случае смеси трех трейсеров 33, 16 и 24 есть некоторое перекрывание полос (рис. 8.9), за исключением одной полосы для комплекса кобальта при 2058 см"1.

Методы расчета, такие как мультивариабельный метод, основанный на методе наименьших квадратов, алгоритмах частичного метода наименьших квадратов [78] или одновариантный метод [77], позволяют количественно определять каждый трейсер в диапазоне 10-100 пмоль. Градуировочные графики для определения карбамазепина в моно- и тройном иммуноанализе CMIA приведены на рис. 8.10.

Новые усовершенствования метода CMIA

Чувствительность метода CMIA хорошо подходит для количественного определения лекарств в сыворотке крови, но это не подходит для случая, когда работают с пестицидами, которые требуют чувствительности, отвечающей требованиям ЕС для пестицидов в питьевой воде (максимально допустимая концентрация 0,1 мкг/л). Последние исследования направлены на повышение чувствительности метода CMIA путем присоединения нескольких М-СО на пробах, образованных РАМАМ-дендримерами антител [19], или путем применения авидина, который может быть затем использован для связывания с биотинилированными антителами [18]. Детектирование таких меченых антител может быть проведено на мембранах, тем самым исключается стадия экстрагирования свободной фракции с помощью растворителя.

 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ ОРИГИНАЛ   След >