Идентификация микобактерий, изолированных из объектов внешней среды

Микобактерии, изолированные из объектов среды обитания животных и зверей в количестве 87 культур, были идентифицированы по схеме, разработанной ВИЭВ (Юдин, 1972). Результаты представлены в табл. 22.

Для более детальной идентификации отобрали 157 культур микобактерий, изолированных из объектов среды обитания животных 8 сельскохозяйственных и звероводческих предприятий. У выделенных культур изучали морфологические, тинкториальные, культуральные, биохимические и биологические свойства. Апробировано более 15 методик, которые используются как в нашей стране, так и за рубежом. Получены следующие результаты.

Культуральные свойства. На яичных средах микобактерии туберкулеза бычьего вида образовывали колонии гладкие (S-форма) и шероховатые (R-форма). Это были крошкоподобные мелкие либо крупные блестящие или матовые единичные колонии или их скопления.

Микобактерии, отнесенные к кислотоустойчивым сапрофитам, росли быстро, обычно на 2-5-й день, в виде мелких или средних размеров колоний, округлых, гладких, серовато-влажных и морщинистых с ярко выраженной оранжевой, желтой окраской или без нее.

Микобактерий второй группы по Е.Н. Runyon росли несколько медленнее, чем микобактерии-сапрофиты (на 9-14-й день), окрашивались в ярко-оранжевые тона независимо от того, выращивались они на свету или в темноте. Эти микобактерии хорошо росли на яичных средах при 22°С и 37°С, но не давали роста при 45°С и 52°С, в то время как микобактерии-сапрофиты росли при 45°С, а М. phlei — при 52°С.

Микобактерии туберкулеза бычьего, птичьего видов с ослабленной вирулентностью и интрацеллюлярные не росли на мясопептонном агаре. Сапрофитные микобактерии хорошо росли на МПА, скотохромогенные — несколько медленнее. Следовательно, можно заключить, что способность к росту в широком диапазоне температурных границ является признаком, характерным для кислотоустойчивых сапрофитов, и может быть использована как дифференциальный тест.

Пигментообразование. М. bovis, М. avium и М. intracellularae не образовывали пигмента ни в темноте, ни на свету. Желто-оранжевый пигмент был отмечен у двух штаммов М. intracellularae в более поздние сроки выдерживания в термостате. У большинства сапрофитных и скотохромогенных микобактерий пигментообразование выявлено независимо от того, выращивались они на свету или в темноте. У 9 культур кислотоустойчивых сапрофитов, изолированных в сельскохозяйственном предприятии «Маяк», пигментация не выявлена.

Следовательно, пигментация не может считаться стойким признаком и не может быть в полной мере использована как дифференциальный тест.

Образование корд-фактора. У микобактерий бычьего вида, выращенных в среде Сотона с сывороткой, наблюдали образование кос, жгутов, правильно сформированных кучек; у сапрофитов, скотохромогенных, а также у М. intracellularae строгого формирования клеток не установлено. Как правило, такие микобактерии были разбросаны беспорядочно.

Характеристика кислотоустойчивых микобактерий

Таблица 22

сз

&

Й

S

Й

к

м

S

>s

я

я IT я w

2 И CU—

« S X х

4 5 6 7 8 9 10 11 12

w Обесцве-

® н чивание Группа

  • § д _ МИКО-
  • s Й « ,я >s 35
  • S s & § о 2 бактерии

О-, f"1 г > X ® О /

o' W О g о. g (вид)

е * g о g

13 14 15 16

Сельскохозяйственное предприятие

  • 10
  • 5-9

более

+ Сапрофиты

Атипичная

  • 8-9
  • 1

Мелкие, желтовато-оранжевые Желтоватооранжевые

Сельскохозяйственное предприятие

2 11-12 Гладкие,

серовато-белые

- + - - + - + 2-4 +

3 48-50 кРУглые’ влажные, прозрачные

- - - + + + + 4Д°

Птичий

Бычий

11 5-8

Гладкие, желто- + + ± + до 100

вато-оранжевые +++ +

Звероводчесхое сельскохозяйственное предприятие

±

±

Сапрофиты

1 33-34

Гладкие, 2-4

шаровидные +

-

-

Птичий

Продолжение табл. 22

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

2

44-57

Сухие, крошковидные

-

-

-

-

+

+

+

+

4-6 + +

-

-

-

Бычий

3

9-10

Желто вато-оран -жевые

+

+

+

+

-

-

-

-

100

+ ++ +

+

+

Сапрофиты

3

25-26

Гладкие, мелкие, зернистые

-

-

-

-

-

-

-

±

-

-

-

-

С ослабленой вирулентностью

Сельскохозяйственное предприятие

  • 16-17
  • 30-32
  • 6-11

желтовато-оранжевые

10-12

влажные

Влажные

Мелкие, влажные сероватые Мелкие, сухие, шероховатые

-

-

+

-

-

+ -

±

1-5++

-

-

-

Птичий

-

-

-

-

+

+

+

2-4+

-

-

-

Бычий

±

+

±

+

+

доЮО

++++

±

±

Сапрофиты

+

+

+

+

_

_ _

_

100

-

+

+

Атипичная

Звероводческое сельскохозяйственное предприятие

14-15

Округлые,серобелые, влажные

Птичий

Окончание табл. 22

1

2

3

4

5

6

7 8 9

10 11

12 13

14

15

16

3

39-43

Мелкие, зернистые

-

-

-

+ +

- +

4-8 ++

-

-

Бычий

9

4-10

Серовато- белые

-

±

±

+ - -

-

зо-юо ++++

±

±

Сапрофиты

Звероводческое сельскохозяйственное предприятие

2

13-19

Крупные серовато-влажные

-

-

+

- +

- +

2-8 ++

-

-

Сапрофиты

6

4-6

Серовато белые, влажные

±

+

+

+

-

бО-ЮО

++++

+

+

Атипичные

Сельскохозяйственное предприятие

18

3-12

Слизистые, полу-шароровидные, гладкие

±

+

+

+

-

более

30 ++++

++++

±

±

Сапрофиты

2

3-4

Гладкие, полукруглые

+

+

+

+ +

-

++++

-

-

Атипичные

Контроль

А

Влажные, желто

+

+ - -

++++ ++++

Музейные штаммы

и

вато-оранжевые

M.phlei, М. smegmatis

Каталазная активность. Микобактерии туберкулеза бычьего вида и М. intracellularae обладали слабовыра-женной активностью, а при прогревании культур до 68°С в течение 30 мин каталазная активность у них исчезала. Сапрофитные и скотохромогенные микобактерии обладали различной каталазной активностью (табл. 23) и не теряли ее после прогревания.

В полуколичественном тесте высота каталазной активности достигла 100 мм и выше. У микобактерии туберкулеза с ослабленной вирулентностью каталазная активность не выявлена.

Формамидазная активность была отрицательной у патогенных культур М. bovis, М. avium. Культуры авирулент-ных микобактерий, за исключением 4 из 63 (6,3%), обладали положительной формамидазной активностью и были отнесены к кислотоустойчивым сапрофитам.

Формамидазная активность была отрицательной у патогенных культур и штаммов М. intracellularae. Микобактерии-сапрофиты, за исключением 5 культур М. fortuitum, обладали положительной формамидазной активностью. У двух культур, отнесенных к М. phlei, отмечена слабая формамидазная активность. У М. intracellularae формамидазная активность была отрицательной, а 3 культуры М. gordonae из 13 дали формамидазоположительную реакцию.

При анализе данных табл. 23, с учетом указанных тестов, 21 культуру микобактерий можно было бы определить как М. gordonae или как М. scrofulaceum.

По литературным данным известно, что М. gordonae гидролизует твин-80, в то время как М. scrofulaceum не способна к этой реакции. Учитывая этот и другие факты, мы изучили диагностическую ценность некоторых биохимических тестов (табл. 24).

Указанными тестами было изучено 157 культур микобактерий, изолированных нами в течение трех лет из объектов животноводческих помещений сельскохозяйственного предприятия «Покровский».

Таблица 23

Результаты дифференциации микобактерий, изолированных из объектов среды обитания животных

(первый этап)

СЗ н о о X О

Рост на среде Петраньяни при температуре, °C

Е

03

X

Патогенность для

сч

СЗ

к

X о g X с

X о к к

X во X

?

Формамидазная активность

х « X о оз а “ х X к «

Вид микобактерий

9

11-17

+

+

+

-

±*

-

-

-

Слабая +3,5

-

М. intracellularae

50

2-6

+

+

+

+

+

**

Не заражали

30-100 + ++ +

+

-

+ -

***

М. smegmatis

9

2-5

+

+

+

+ +

+

-

-

То же

30-90 + ++ +

(±2)

-

+ -

М. phlei

28

15-25

-

+

-

-

-

+

+

«

Слабая +3,5

-

+

-

М. bovis

30

2-7

+

+

-

- +

-

-

-

«

30-35 + +

(+5)

-

-

М. fortuitum

21

9-27

+

+

-

- +

+

Не заражали

30-90 + ++

(±3)

-

-

М. gordonae, М. scrofulace ит не идентифицированы

Всего: 157

  • * У двух культур отмечена желтовато-оранжевая окраска.
  • ** Заражение лабораторных животных осуществлялось выборочно.
  • *** Часть культур обесцвечивалась жавелевой водой по методике Е.Л. Скрябиной.

Как видно из табл. 24, для М. bovis характерна уреазная активность. Наибольшей активностью обладала культура М. scrofulaceum, которая разлагала мочевину, никотинамид и пиразинамид. Из 13 культур, определенных как М. gordo-пае, 8 не разлагали мочевину и только 5 обладали уреазной активностью.

Для М. intracellularae характерна никотинамидазная и пиразинамидная активность. Быстрорастущие микобактерии были определены как М. fortuitum, М. phlei и М. smeg-matis. Культуры М. fortuitum быстро и хорошо росли на среде Петраньяни, образуя гладкие серовато-белые, влажные круглые или шероховатые неокрашенные колонии. У 22 культур этих микобактерий установлена ацетамидазная, уреазная, аллантоиназная и формамидазная активность. У 3 культур отмечена слабая никотинамидазная активность и у 2 — пиразинамидазная.

Микобактерии, отнесенные к кислотоустойчивым сапрофитам, М. phlei и М. smegmatis, обладали более широким амидазным спектром. М. phlei ферментировали мочевину, никотинамид, пиразинамид и формамид. Однако, как мы уже указывали, у 2 культур из 6 отмечена слабая формамидазная активность. У 29 культур М. smegmatis выявлена ферментативная активность в отношении 7 амидов большого амидного ряда, за исключением малонамида. У 2 культур выявлена слабая ферментация салициламида.

Тест восстановления нитратов дал положительный результат у М. fortuitum, М. phlei и М. smegmatis. Остальные культуры дали отрицательную реакцию на редукцию нитратов.

Салициловый натрий в концентрации 0,1% оказывал губительное действие на микобактерии бычьего вида. Все другие давали хороший рост на среде Левенштейна-Иенсе-на с добавлением салицилового натрия. Этот тест позволяет отдифференцировать апатогенные кислотоустойчивые микобактерии от возбудителя туберкулеза бычьего вида.

При изучении устойчивости микобактерии к 5%-му хлориду натрия было установлено, что указанная конценТаблица 24

Культурально-биохимическая характерактеристика, микобактеркй, изолированных из объектов животноводческих помещений сельскохозяйственного предприятия «Покровский»(второй этап)

Тесты

1

М. bovis

2

Виды микобактерий

М. smegmatis

8

Не идентифицированы 9

М. scrofu-laceum

3

М. gordo-пае

4

М. intracel-lularae

5

М. fortui-tum

6

М. phlei

7

Количество штаммов

25(19,6%)

8 (6,2%)

13(10,2%)

7(5,5%)

27 (21,3%)

6 (4,4%)

31 (24,5%)

10(7,8%)

Амидный ряд

3

3,5,6

3 или 0

5, 6

1,3, (5±), (6±), 8

3, 5,6

1,2, 3,4, 5, 6, (7±), 9

Редукция нитратов

-

-

-

-

+

+

+

Рост на среде Левенштей-на-Иенсена с

+

+

+

+

+

+

салициловым

натрием Формамидазная

-3

+22

±

+

активность

Устойчивость

к 0,5%-му хлористому натрию

-

-

-

-

+

+

+

1

2

3

4

5

6

7

8

9

к 0,1 %-й пикриновой

+

+

+

кислоте

к 0,2%-й пикриновой

кислоте

Рост на среде с NaNO?

как единственным источ

ником азота

-

-

-

-

Через 1 неделю

Через 3 недели

Через 3 недели

Деградация салицилового натрия и ПАСК

-

-

-

-

Через 1 неделю

Через 3 недели

Через 3 недели

Гидролиз твина - 80

-

-

+

-

±

+

+

Примечание: 5(±) — отдельные культуры давали сомнительные или слабоположительные реакции.

трация соли задерживает рост на глицериновом бульоне М. bovis и скотохромогенных микобактерий. М. fortuitum, М. smegmatis и М. phlei в течение 2-3 недель образуют на указанной среде хорошо сформированную пышную пленку

Использование нитрата как единственного источника азота проверяли на синтетической среде, содержащей азот только в виде нитрата натрия. Установлено, что М. bovis и скотохромогенные микобактерии не обладали способностью усваивать нитратный азот и расти на этой среде, в то время как М. fortuitum давали видимый рост в течение одной недели. К концу второй недели появлялся рост М. smegmatis, и только на третьей неделе культивирования отмечали очень скудный рост М. phlei. На контрольных средах без добавления NaNO2 не установлено роста ни у одной из изучаемых культур.

Резистентность к пикриновой кислоте характерна для микобактерий четвертой группы по Е.Н. Runyon.

Деградация салицилового натрия в недельный срок была выявлена у 23 культур М. fortuitum и только 4 культуры не окрашивали среду в черный цвет. М. smegmatis и М. phlei также росли на средах, но среды при этом не окрашивались в черный цвет. Лишь через три недели примерно в 80% случаев наблюдали почернение среды. Аналогичные явления были отмечены и при изучении деградации ПАСК.

Для оценки сахаролитической активности у изучаемых микобактерий были использованы пестрые ряды. Сахаролитическая активность была изучена у 117 культур микобактерий. Результаты этих наблюдений показаны в табл. 25, из которой можно заключить, что наиболее активными оказались микобактерии-сапрофиты М. phlei, М. smegmatis.

Обращает на себя внимание аураминовая дисковая проба, с помощью которой, по данным отечественных и зарубежных ученых, можно легко и быстро дифференцировать вирулентные микобактерии (аураминположительные) от атипичных и сапрофитных кислотоустойчивых микобактерий (аураминнегативные).

По этой пробе мы проверили более 100 культур миТаблица 25

Сахаролитическая активность микобактерий

Многоатомные

Виды микобактерий

Число

штам

мов

спирты

М. bovis

25

±

-

-

-

-

-

+

-

-

-

-

-

-

-

М. scrofula-

8

+

сеит

М. gordonae

13

+

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

М. intracel-

7

1

lularae

/

i

М. fortuitum

27

+

+

+

-

-

-

18+

-

-

-

-

-

-

-

М. phlei

б

+

+

+.

+

+

-

+

-

-

-

+

+

-

-

М. smegmatis

31

+

+

+

+

+

+ +

+

+

-

-

+

+

+

28+

Контроль

М. avium

1

+

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

М. bovis

1

±

-

-

-

-

-

+

-

-

-

-

-

-

-

М. smegmatis

1

+

+

+

+

+

+ +

+

+

-

-

+

+

+

+

М. phlei

1

+

+

+

+

+

-

+

-

-

-

+

+

-

-

Примечание. «±» - реакция сомнительная (окраска среды с коричневатым оттенком) кобактерий, изолированных с объектов среды обитания животных. Полученные результаты позволяют сделать заключение о высокой диагностической ценности аураминовой дисковой пробы. Следует лишь указать, что микобактерии, определенные нами по другим тестам как М. intracellularае, в большинстве случаев были аураминположительными. Следовательно, аураминовую дисковую пробу можно использовать для дифференциации патогенных микобактерии от непатогенных как дополнительный метод.

Биопроба. У 151 кролика и 151 морской свинки, зараженных патогенными микобактериями, изолированными в хозяйствах (см. табл. 22), на секции выявлены характерные туберкулезные изменения. У животных, в том числе у четырех норок, зараженных кислотоустойчивыми сапрофитами и атипичными микобактериями, отмечены хорошее развитие, прибавка в массе, а после убоя на месте инъекции культур ни у одного животного не было найдено никаких поражений. Лимфатические узлы, селезенка, сальник, печень, почки, легкие, сердце были стерильны в отношении микобактерий как при окраске мазков-отпечатков, так и при посевах на яичные среды.

Устойчивость к лекарственным препаратам (ПАСК, фтиазид, тубазид, стрептомицин) у выделенных культур не определяли, поскольку были получены четкие результаты биологической пробы.

Для подтверждения видовой принадлежности микобактерий у 19 культур, изолированных с объектов животноводческих помещений, а также у 25 культур из объектов внешней среды сельскохозяйственного предприятия «Блюд-чанский» изучены патогенные свойства. У 28 кроликов и 28 морских свинок выявлены характерные туберкулезные изменения (узелковая форма). У животных, зараженных, по предварительным данным, микобактериями-сапрофитами, отмечены хорошее развитие, прибавка в массе, а после убоя ни у одного животного не было найдено никаких поражений. Лимфатические узлы, селезенка, сальник, печень, почки, легкие, сердце были стерильными в отношении микобактерий как при окраске мазков-отпечатков, так и при посеве на яичные среды.

У двух кроликов, зараженных микобактериями, отнесенными к третьей группе по Е.Н. Runyon, отмечено увеличение селезенки, а у морской свинки — незначительное увеличение регионарных паховых лимфатических узлов. В мазках-отпечатках из места введения и селезенки найдены единичные кислотоустойчивые палочки.

С эпизоотологической точки зрения представляет интерес характеристика объектов и микобактерий, изолированных с них. Фрагмент этих сведений представлен в табл. 26.

При индикации микобактерий туберкулеза из некоторых объектов птичников, неблагополучных по туберкулезу, нами было выделено 37 культур возбудителя туберкулеза Из них у 16 культур изучили морфологические, культуральные и биологические свойства, а также их способность к росту при температуре 38°С и 42°С.

Мазки, приготовленные из 25-75-дневных культур, подвергали микроскопии, при этом их окрашивали не только по Цилю-Нильсену, но и по Граму и Вейксельбауму. В мазках из 25-дневных культур, окрашенных по Цилю-Нильсену, микобактерии туберкулеза представлялись в виде маленьких, иногда изогнутых палочек, равномерно окрашенных в рубиново-красный цвет. В мазках культур, впоследствии отнесенных к бычьему виду, микобактерии были несколько короче и толще, чем в мазках, приготовленных из культур птичьего вида. В мазках, окрашенных по Граму, микобактерии туберкулеза были темно-фиолетового цвета, а по Вейксельбауму — красного.

При микроскопии мазков, приготовленных из 75-дневных культур, наблюдали выраженный полиморфизм микобактерий туберкулеза. В мазках находили мелкие точечные формы в виде кокков, коротенькие и длинные палочки, некоторые из них имели булавовидные утолщения с неравномерной окраской отдельных участков. Их расположение

Таблица 26

Характеристика объектов и изолированных с них микобактерий

Объекты

Виды микобактерий

М.

bovis

М. scrofu-laceum

М.

gor-donae

М. in-tracel-lularae

M. fortu-itum

M. phlei

M.

smeg-matis

«Маяк»

Пол стойла

2

-

-

-

-

-

1

Кормушки

1

-

-

-

1

-

3

Стены

-

-

-

-

-

-

-

Центральный проход

-

-

-

-

-

1

-

Навозный проход

-

-

-

1

2

-

-

Итого

3

-

-

1

3

1

4

«Таганский»

Пол стойла

-

-

-

-

-

-

-

Кормушки

-

-

-

-

-

2

4

Стены

-

-

-

-

-

-

1

Центральный проход

-

-

-

1

-

-

3

Навозный проход

-

-

-

-

-

-

4

Итого

-

-

-

1

-

2

12

«Отреченский»

Пол стойла

9

-

5

2

11

-

8

Кормушки

8

4

4

3

10

1

13

Центральный проход

2

1

2

-

1

-

5

Навозный проход

3

2

2

1

3

3

1

Навозная канава

3

-

-

1

2

1

4

Стены

-

1

-

-

-

1

-

Итого

25

8

13

7

27

6

31

Всего

28

8

13

9

30

6

47

было разнообразным: в виде одиночных палочек, под углом или в виде кучек.

В процессе приготовления мазков было отмечено, что из 16 культур 13 хорошо растирались на предметных стеклах, а 3 — плохо. Культуральные свойства изучали на сре-

Таблица 27

Культуральные свойства микобактерий туберкулеза, выделенных

из объектов внешней среды

Среда

Номера

Среда

Номера

МПГБ

Номера

Петраньяни

культур

Павловского

культур

культур

Суховатый налет с жел-

Обильный

15, 12,

Бульон

то-оранже-вым пигмеи-

2, 9,4

извилистый беловато-

8, 14, 9, ю,

прозрачен, на дне оса

14, 12,

том и слабо

сероватый

5,4, 1,

док в виде сеточки или

10, 5

выраженной зернистостью

налет

3, 2

зонтика

Суховатый

Бульон прозрачен, на

морщинистый налет

Сухой налет

поверхности

с круглыми

3,7,8

серовато-бе-

6

островки пленок,

16, 13

пуговицеобразными

лого цвета

соприкасающиеся

KU J1U г! И л IV1 и

между собой

Влажный

Крупинча-

слизистый

1,5,6,

тые колонии,

Сухая пленка

серовато

Ю, 14,

возвышаю

7

11

желтоватый

12

щиеся над

налет

средой

Бульон про

Колонии сухие, ше

Чешуйчатый

зрачен, на поверхности

П, 13,

налет в виде

п, в,

его слизи

2, 3, 15,

роховатые,

16

маленьких

16

стая пленка,

7, 9,4

напоминают сухой творог

бородавок

на дне осадки в виде сетки

Отдельные округлые ко

Бульон прозрачен, на

лонии с углублениями

15

-

-

дне хло

6

бледно-серого цвета

пьевидный осадок

де Петраньяни, картофельной среде Павловского и МПГБ. Данные по характеристике культуральных свойств тубер-

кулезных культур представлены в табл. 27, из которой видно, что микобактерии туберкулеза, выделенные из объектов внешней среды, неодинаково растут на питательных средах.

При изучении культуральных свойств микобактерий туберкулеза из всех 16 культур производили посевы на среду Петраньяни и выдерживали их при температуре 38°С и 42°С. В этом опыте выявляли и способность роста культур. При изучении культуральных свойств микобактерий туберкулеза из всех 16 культур производили посевы на среду Петраньяни и выдерживали их при температуре 38°С и 42°С. В этом опыте выявляли и способность культур к росту в определенных границах температурного режима. Так, при температуре 38°С 14 культур дали первые признаки роста на среде Петраньяни в течение 6-9 дней, а при температуре 42°С - в течение 5-8 дней. В то же время 3 культуры при температуре 38°С давали первые признаки роста на 12-18-й день, а при температуре 42°С даже при 39-дневном инкубировании роста не было установлено. Эти же культуры с трудом эмульгировались в момент приготовления микробной суспензии. Результаты наших исследований согласуются с данными других исследователей, которые при изучении культуральных свойств микобактерий туберкулеза различных видов указывали, что признак роста в широком диапазоне температурных границ является характерным для птичьего вида, тогда как культуры бычьего и человеческого видов совсем не растут при температуре 42-43 °C. По морфологическим, культуральным свойствам, а также по способности к росту на среде Петраньяни в определенных границах температурного режима культуры №1-10, 12, 14, 15 могут быть отнесены к птичьему виду, а культуры 11,13 и 16 - к бычьему.

Для подтверждения принадлежности выделенных культур к тому или другому виду были заражены кролики и морские свинки. Культуры 3, 8, 9 дополнительно были проверены на петушках. Каждой культурой заражали двух кроликов массой 1,4-1,7 кг в возрасте 2-2,5 мес и двух морских свинок массой от 300 до 385 г.

Кроликов и морских свинок перед заражением подвергали аллергическому исследованию птичьим и бычьим туберкулинами, которые вводили внутрикожно двукратно в дозе по 0,1 мл. Учет реакции проводили через 48 ч в после первого введения туберкулинов и через 24 ч после второго введения.

Заражение морских свинок производили подкожно в области левого паха, кроликов и кур — внутривенно в дозе по 1 мг сырой микробной массы в 1 мл жидкости. Зараженные животные содержались в общем помещении, но в отдельных клетках по 2 животных в каждой. Наблюдения за животными велись в течение 5-6 месяцев с момента заражения. Животных вскрывали в день гибели или убоя. При этом обнаруживали наличие или отсутствие туберкулезных изменений в паренхиматозных органах, делали мазки-отпечатки из печени, селезенки, почек, сердца, легких, гастральных или брыжеечных лимфатических узлов. У морских свинок помимо указанных органов для приготовления мазков-отпечатков использовали материал из места введения штамма, при надобности — из паховых лимфатических узлов. Из селезенки и печени производили посевы на среду Петраньяни. Данные патолого-анатомических исследований кроликов и морских свинок, зараженных микобактериями туберкулеза, выделенными из объектов внешней среды, иллюстрируются табл. 28-30.

Исходя из данных патолого-анатомических исследований, представленных в таблицах, можно заключить, что культуры, выделенные из объектов внешней среды, явились патогенными для кроликов, в то время как морские свинки, за исключением шести голов, туберкулезом не заболевали. Культуры 1-10, 12, 14 и 15 оказались весьма вирулентными для кроликов. При внутривенном введении этих культур кроликам смерть их наступала через 16-27 дней. На секции ни в одном случае не обнаружили туберкулезных очагов, однако в мазках-отпечатках, приготовленных из печени, селезенки и других органов, было найдено множество микобактерий туберкулеза. Характерным признаком на вскрытии для всех кроликов, инфицированных вышеназванными культурами, было увеличение селезенки в 1,5-2 раза. У морских свинок эти культуры каких-либо патологических изменений, за исключением местного процесса в местах введения, не вызывали.

У 6 кроликов, зараженных культурами И, 13, 16, на секции обнаружили генерализованный туберкулез с бугорковыми поражениями в селезенке, легких, печени, других органах. Кролики при таком течении инфекции погибали в течение 49-64 дней. При микроскопии мазков-отпечатков, приготовленных из паренхиматозных органов этих кроликов, обнаруживали большое количество полиморфных палочек, хорошо окрашивающихся по Цилю-Нильсену. Для морских свинок эти культуры также оказались вирулентными. При патолого-анатомическом исследовании таких свинок (6 голов) устанавливали генерализованный туберкулез с наличием бугорков в печени, селезенке и легких. Морские свинки в этом случае погибали в течение 41-59 дней с момента заражения.

Таблица 28

Результаты заражения кроликов микобактериями туберкулеза

Номер культуры

Количество кроликов

Срок гибе-ли, дней

Форма процесса

Вид возбудителя

зараженных

павших

1

2

3

4

5

6

9

2

2

16-18

Септиче-ская (тип Йерсена)

Птичий

10

2

2

18-20

5

2

2

18-21

14

2

2

19-23

7

2

2

19-21

15

2

2

20-20

8

2

2

20-24

3

2

2

20-26

6

2

2

21-23

1

2

2

22-23

2

2

2

23-23

4

2

2

23-25

12

2

2

24-27

1

2

3

4

5

6

11

2

2

49-50

Узелковая (тип Вил-лемен)

Бычий

16

2

2

53-55

13

2

2

53-64

Всего

32

32

-

-

-

Таблица 29

Результаты заражения морских свинок микобактериями туберкулеза

Штамм

Кол-во морских свинок

Пали

1

„ „ Убиты на

Срок, дней

г какой день

Номер животного

2 12 12

Степень поражения

1 2

1

2

-

-

-

-

182

182

3

3

2

2

1

-

5

-

-

182

4

2

3

2

1

-

26

-

-

182

4

3

4

2

-

-

-

-

182

182

3

2

5

2

-

-

-

-

182

182

2

2

6

2

-

-

-

-

182

183

3

2

7

2

-

-

-

183

183

2

3

8

2

-

-

-

-

165

165

2

2

9

2

-

-

-

-

165

174

2

3

10

2

-

-

-

-

174

174

3

3

11

2

1

1

57

59

-

-

1

1

12

2

-

-

-

-

174

174

3

3

13

2

1

1

41

49

-

-

1

1

14

2

-

-

-

-

173

173

3

3

15

2

-

-

-

-

173

173

3

3

16

2

1

1

50

57

-

-

1

1

Всего

32

5

3

1

1 - генерализованный туберкулез (узелковая форма);

  • 2 - гнойники на месте введения культуры;
  • 3 - отсутствие изменений;
  • 4 - другие заболевания.

Таблица 30

Характеристика течения заболевания у морских свинок, зараженных микобактериями туберкулеза

Степень поражения

Пали

Убиты

Номера культур

1

6

-

11, 13, 16

2

-

9

2, 4, 5, 6, 7, 8, 9

3

-

15

1,3,4, 6, 7, 9, 10, 12, 14, 15

4

2

-

2,3

Итого

8

24

Две морские свинки, зараженные культурами 2 и 3, погибли по причинам, не имеющим отношения к туберкулезной инфекции. У первой установлен перитонит, у другой — бронхопневмония и воспаление перикарда. Остальные 24 морские свинки были убиты. При патолого-анатомических исследованиях убитых морских свинок нам не удалось установить каких-либо патологических изменений, свойственных туберкулезу, за исключением наличия гнойников у 9 свинок в местах введения культуры величиной с лесной орех. При микроскопии мазков-отпечатков из места введения туберкулезной культуры находили единичные туберкулезные палочки. При посевах материала из печени и селезенки, произведенных на среду Петраньяни, а также из мест иньекций культуры не было получено.

При микроскопическом исследовании мазков-отпечатков, приготовленных из паренхиматозных органов кроликов и морских свинок, зараженных исследуемыми культурами, для регистрации результатов мы воспользовались схемой, суть которой сводится к следующему:

  • - редкие палочки «+»;
  • - умеренное количество микобактерий «++»;
  • - обильное количество микобактерий «+++»;
  • - чрезвычайно много палочек «++++».

Результаты исследований показаны в табл. 31.

Как видно из этой таблицы, микобактерии туберкулеза в больших количествах обнаруживались в печени и в селезенке. В мазках-отпечатках, приготовленных из сердца, легких и почек, микобактерий туберкулеза встречалось несколько меньше, а иногда они совсем не обнаруживались. При посеве материала из печени и селезенки на среду Пе-траньяни во всех случаях наблюдали рост микобактерий туберкулеза.

Как указывалось выше, культуры 3, 8, 9 были дополнительно проверены на петушках 7-месячного возраста, которые погибли в течение 33-50 дней с начала заражения. При вскрытии петушков обнаруживались характерные для туберкулеза изменения — печень, селезенка, почки были пронизаны мелкими бледно-серыми узелками величиной с просяное зернышко, которые легко размазывались на предметном стекле. В печени узелков было значительно больше, чем в селезенке или почках. При микроскопии мазков-отпечатков, приготовленных из указанных органов, находили значительное количество микобактерий, отчетливо выделяющихся на голубом фоне мазка. В результате комплексного изучения морфологических, тинкториальных, культуральных, патогенных свойств, а также учета способности культур расти в определенных границах температурного режима 13 культур оказались птичьего вида и 3 — бычьего.

Таблица 31

Результаты микроскопии мазков-отпечатков из органов кроликов, зараженных микобактериями туберкулеза

Номер культуры

Печень

Селезенка

Лимфоузлы

Сердце

Легкие

Почки

1

2

3

4

5

6

7

1

+ + + +

+ + + +

+ +

+

+ +

+ +

2

+ + + +

+ + + +

+ +

1

+

+

3

+ + + +

+ + + +

+

+

+

4

+ + + +

+ + + +

+ + +

+

+

+

5

+ + + +

+ + + +

-

-

-

+

6

+ + + +

+ + + +

+ +

+

+

+

7

+ + + +

+ + + +

+

+

+ +

+ +

8

+ + + +

+ + + +

+ +

-

+

-

1

2

3

4

5

6

7

9

+ + + +

+ + +

+

+

-

+

10

+ + + +

+ + + +

+

-

+

+

11

+ + + +

+ + + +

+ + +

+

+ + +

+ +

12

+ + + +

+ + + +

+

-

+

-

13

+ + + +

+ + + +

+ + +

+

+ + + +

+ +

14

+ + + +

+ + + +

+

-

+

-

15

+ + + +

+ + + +

+

+

+

+

16

+ + + +

+ + + +

+ +

+ +

+ +

+

При выполнении работы по взятию материала с целью выяснения степени обсемененности различных объектов птичников возбудителем туберкулеза на одной из птицеферм нами был пойман ястреб-тетеревятник. При бактериологическом исследовании из печени его была выделена культура микобактерий (№ 17). Рост микобактерий туберкулеза на среде Петраньяни был обнаружен через 27 дней в виде влажных колоний с темноватым оттенком. В мазках из них найдена масса кислотоустойчивых палочек разных размеров, расположенных поодиночке и кучками, с выраженной зернистостью. На мясопептонном глицериновом бульоне культура покрывала дно колбы в виде легкораз-бивающейся сеточки, хорошо эмульгировалась и размазывалась по стенке колбы, бульон был прозрачным. На среде Павловского выросли беловато-серые колонии, покрывающие влажным налетом всю поверхность картофельного клина. При заражении двух кроликов и двух морских свинок с целью типизации выделенного штамма по методу Алика-евой культура оказалась патогенной для кроликов: первый кролик погиб через 17 дней, второй — через 21. Морские свинки оставались живыми на протяжении пяти месяцев, а затем были убиты. При вскрытии у них найдены гнойники в месте введения культуры. На основании комплексного изучения морфологических, культуральных свойств и учета патогенности для кроликов выделенный штамм от ястребатетеревятника оказался птичьего вида. Этот факт говорит о том, что дикие птицы инфицированы возбудителем туберкулеза и могут рассматриваться как источник возбудителя туберкулеза домашних птиц и свиней.

 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ ОРИГИНАЛ   След >