Введение

В работе представлены накопленные авторами собственные материалы и данные отечественной и зарубежной литературы, касающиеся представителей как патогенных, так и атипичных микобактерий рода Mycobacterium. Авторами показана частота выделения микобактериальных культур из биологического материала, полученного от крупного рогатого скота, реагирующего на туберкулин для млекопитающих, с объектов внешней среды в хозяйствах Западной Сибири с различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу. Описаны лабораторные тесты и биологические признаки микобактерий, изолированных из биоматериала. Особое внимание уделено методам дифференциации и идентификации, позволяющим определить родовую и видовую принадлежность выделенных культур с использованием различных питательных сред, биохимических тестов и при разных методах заражения лабораторных животных.

Проблема классификации и идентификации микобактерий занимает умы исследователей более ста лет, но до сих пор остается актуальной. В эпидемиологии и эпизоотологии туберкулеза проблема видов микобактерий имеет не только теоретическое, но и большое практическое значение, так как создает основу для успешного проведения комплекса противотуберкулезных мероприятий. Определение видовой принадлежности изолированных культур микобактерий позволяет более точно определить источники инфицирования здоровых животных, птиц или зверей. Предмет нашей работы - изучение микобактерий, изолированных из организма животных, реагирующих на туберкулин, и объектов внешней среды.

Методы диагностики туберкулеза

ТУБЕРКУЛЕЗА

Прижизненная диагностика туберкулеза (аллергический метод)

Обнаружение у животного повышенной чувствительности замедленного типа к микобактериям и продуктам их распада является признаком, свидетельствующим о контакте с микобактериями и происходящих в нем иммунобиологических изменениях. Это явление используют как диагностический тест и определяют туберкулиновой пробой. Следует отметить, что туберкулин впервые получил не Р. Кох, как это указывается во многих руководствах, а латыш Х.И. Гельман, изготовивший аллерген в 1888 г. и только в 1892 г. опубликовавший в журнале «Архив биологических наук» технику изготовления препарата и результаты его испытания для диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота. Он же совместно с ВТ. Гутманом впервые разработал и внедрил в ветеринарную практику подкожный метод ту-беркулинизации крупного рогатого скота. Р. Кох изготовил туберкулин и сообщил об этом в 1890 г., этом же году независимо от Х.И. Гельмана и Р. Коха препарат изготовил в Варшаве О.Ф. Буйвид, давший ему название туберкулин, а материалы о нем опубликовал в 1891 г.

Основным методом аллергической диагностики туберкулеза является внутрикожная туберкулиновая проба, предложенная в 1907 г. Манту. По простоте выполнения и эффективности исследования она до настоящего времени не имеет себе равных. Возможность выявления животных в ранней стадии заражения, до образования у них патологических изменений в органах и тканях, являющихся источником возбудителя инфекции, делает его незаменимым при ликвидации болезни в стаде, особенно в новых случаях ее возникновения.

В нормальных условиях содержания и кормления зараженные животные, как правило, интенсивно реагируют на введение туберкулина. Эффективность исследования достигает 100%, что дает возможность при своевременном обнаружении заболевания выявить и удалить из стада всех инфицированных особей.

Имеются сообщения о том, что в начальный период после заражения возбудителем туберкулеза чувствительность организма животных к туберкулину выражена слабо и степень сенсибилизации повышается по мере прогрессирования туберкулезного процесса. Установлено на искусственно зараженных телятах и овцах, что наибольшая интенсивность реакции на туберкулин при ежемесячно проводимом исследовании наблюдалась через месяц после заражения и в дальнейшем постепенно снижалась, достигая через 4-6 мес 75-50% первоначального показателя. Безусловно, интенсивность реакции увеличивается в период от начала до полного развития повышенной чувствительности замедленного типа, но этот период короткий и заканчивается через 2-3 недели после заражения.

Эффективность туберкулиновой пробы в продолжительно неблагополучных стадах при значительном распространении болезни ниже, чем в свежеинфицированных. Это связано с наличием в таких стадах животных, находящихся в состоянии анергии вследствие прогрессирования туберкулезного процесса. Количество таких животных может достигать 25 и даже 60%. Одной из причин отсутствия реакции на туберкулин у некоторых больных туберкулезом животных является высокое содержание противотуберкулезных антител в их крови как признак высокой активности В-системы иммунитета. Известно, что кроме кооперации клеток Т- и В-систем иммунитета возможна их конкуренция. При этом в крайних позициях таких отношений можно наблюдать полное отсутствие реакции на туберкулин при наличии в крови специфических антител в высоких титрах, и, наоборот, отсутствие антител и проявление ярко выраженной чувствительности к туберкулину. Между этими позициями возможно множество промежуточных состояний, когда проявляются оба фактора (гуморальный и клеточный) с разной степенью интенсивности аллергических и серологических реакций. Такое положение характерно для хронических болезней с внутриклеточным развитием возбудителя и свидетельствует о необходимости использования и аллергического, и серологического методов исследования на туберкулез. Примером успешного их применения являются бруцеллез, паратуберкулез, сап. С этой целью при туберкулезе использовали различные серологические пробы (РСК, РИГА, РП и др.), но в силу малой чувствительности они не нашли широкого применения в ветеринарной практической работе.

До 60-х годов результаты туберкулиновой пробы были решающими при определении состояния стада по туберкулезу. На фоне значительного распространения болезни ошибки были редкими, у реагирующих животных, как правило, обнаруживали туберкулез.

Однако проявление неспецифических реакций на туберкулин привело к потере решающего значения этой пробы при определении состояния стада по туберкулезу и сделало ее ориентировочной при первичной постановке диагноза.

Современная эпизоотология различает две группы неспецифических реакций на туберкулин: парааллергические и псевдоаллергические.

Парааллергические реакции на туберкулин - это реакции, вызванные атипичными сапрофитными микобактериями, микобактериями паратуберкулеза и птичьим видом возбудителя туберкулеза.

Псевдоаллергические реакции на туберкулин - реакции, вызванные факторами немикобактериальной природы. Сенсибилизация организма к туберкулину проявляется при актиномикозных поражениях, гельминтозных заболеваниях, септических явлениях.

Имеющиеся данные показывают, что проявление реакции на туберкулин у скота благополучных хозяйств является глобальной проблемой, обусловленной изменением системы ведения животноводства, его интенсификацией, ведущей к высокой концентрации животных на ограниченных площадях, снижению резистентности организма, воздействию стрессовых факторов и др. Обследование скота благополучных хозяйств разных районов страны с применением видовых микобактериальных аллергенов показало практически повсеместное распространение сенсибилизации, которая в отдельных случаях достигает 98% обследованных животных. В то же время количество животных, реагирующих на туберкулин для млекопитающих, различно и зависит от зоогигиенического уровня содержания и кормления скота: при его снижении количество таких животных достоверно увеличивается.

Многочисленные данные отечественных и зарубежных исследователей показывают, что основной, а возможно, и единственной причиной проявления реакции на туберкулин у скота благополучных хозяйств является сенсибилизация животных атипичными микобактериями. О распространении атипичных микобактерий и их видовом составе в той или иной зоне судят по данным бактериологических исследований. В регионе Западной Сибири, в частности Новосибирской области, причиной парааллергических реакций на туберкулин являются атипичные микобактерии М. fortuitum и М. smegmatis.

Другим методом является сравнительное изучение специфических кожных аллергических реакций со стандартным туберкулином для млекопитающих и сенситинами из атипичных микобактерий. Определение степени распространения сенсибилизации скота атипичными микобактериями с помощью бактериологического исследования материала от животных и объектов окружающей среды или обследованием животных с применением одного туберкулина не отражают истинной картины, так как атипичные микобактерии распространены повсеместно. Однако не все их виды обладают сенсибилизирующими свойствами, а проявление реакции на туберкулин для млекопитающих зависит от уровня сенсибилизации организма животного. Установлено, что у животных, сенсибилизированных атипичными микобактериями, реакции на туберкулин проявляются только при высокой степени сенсибилизации, характеризующейся значительной интенсивностью реакций на аллерген из атипичных микобактерий.

Определение степени сенсибилизации скота атипичными микобактериями с помощью аллергических исследований является ориентировочным методом по сравнению с бактериологической диагностикой. Как указывалось выше, проявление реакции на туберкулин у животных благополучных по туберкулезу хозяйств сделало туберкулиновую пробу ориентировочной при определении состояния стада по этой болезни и вызвало необходимость применения дополнительных методов диагностики. Решающими в диагностике туберкулеза стали патолого-анатомический и бактериологический методы исследований, и положительные результаты туберкулиновой пробы при плановом обследовании скота в благополучных хозяйствах требуют подтверждения или исключения заболевания этими методами диагностики. Туберкулез считают установленным при обнаружении у животных на вскрытии характерных изменений или выделении возбудителя туберкулеза.

Выделение из материала атипичных микобактерий не может свидетельствовать о благополучии животных по туберкулезу в связи с возможностью одновременного нахождения в нем возбудителя туберкулеза и указанных микобактерий. Нам приходилось наблюдать случаи смешанной инфекции, когда в посевах материала с туберкулезными изменениями на питательной среде наблюдался вначале обильный рост атипичных микобактерий, а затем на оставшихся свободных участках среды образовались колонии возбудителя туберкулеза.

Диагностическое значение имеет только наличие или отсутствие в исследуемом материале возбудителя туберкулеза. В то же время отрицательные результаты бактерио-скопического исследования не всегда подтверждают отсутствие туберкулеза. Следовательно, диагностический убой и бактериологическое исследование в некоторых случаях не подтверждают туберкулез даже при его наличии, вследствие чего происходит распространение болезни в стаде.

Общепринятым методом аллергического исследования крупного рогатого скота на туберкулез считается внутрикожное введение туберкулина для млекопитающих в дозе 0,2 мл (10000 ME), учет реакции проводится через 72 ч, аллерген вводят в среднюю треть шеи безыгольным инъек-тором БИ-7М. Быкам-производителям туберкулин вводят в подхвостовую складку. Реагирующими животные считаются при увеличении кожной складки на 3 мм и более.

Свиньям применяют два аллергена - в кожу основания одного уха вводят ППД-туберкулин для млекопитающих, в другое - ППД-уберкулин для птиц в дозе 10000 ME в 0,2 мл объема. Учет проводят через 48 ч. У основания ушной раковины реакция проявляется в виде плотной или тестообразной припухлости кожи размером 20-40 мм и более.

Козам, овцам, собакам туберкулин вводит в области внутренней поверхности бедра, учет реакции проводят через 48 ч.

Курам туберкулин вводят в бородку, учет реакции проводят через 36 ч.

Кроме внутрикожной туберкулиновой пробы, в практике используют офтальмо- и внутривенную пробы. Эти методы исследований на туберкулез сравнительно широко применяли ранее, в период отработки аллергической диагностики болезни. Широкое испытание в практических условиях каждого метода определило его место в общей системе диагностики туберкулеза. В дальнейшем, с переводом животноводства на промышленную основу и увеличением концентрации скота в хозяйствах, эти методы потеряли свое первоначальное значение вследствие недостаточной эффективности и трудности массового использования. Однако в ряде случаев, особенно при затруднениях в определении состояния стада или отдельных животных по туберкулезу, они находят применение. Офтальмопроба, предложенная Валле для исследования крупного рогатого скота (1907 г.), является достаточно эффективной в диагностике туберкулеза. По этому показателю она уступает внутрикожной пробе, но дополнительно к последней выявляет 5-7% зараженных животных. Реакция конъюнктивы у зараженных животных на воздействие туберкулина возникает и протекает быстро - в течение нескольких часов, однако в основе ее лежит тот же клеточный механизм, а скорость возникновения реакции следует объяснить наличием очень развитой сосудистой сети глаза, обеспечивающей концентрацию и быстрый выход сенсибилизированных лимфоцитов в зону воздействия аллергена. В то же время на возникновение этой реакции влияют гуморальные факторы, что подтверждается быстро развивающимся отеком конъюнктивы и таким же быстрым исчезновением воспалительных явлений, чего не может быть при клеточной инфильтрации тканей.

Глазную туберкулиновую пробу рекомендовано проводить крупному рогатому скоту старше 6 лет. Ее проводят двукратно с интервалом 5-6 дней между первым и вторым введением туберкулина. Препарат наносят в количестве 3-5 капель на конъюнктиву при оттянутом нижнем веке. Учет результатов офтальмопробы проводят через 3,6, 9 и 12 ч после повторного введения туберкулина. Реакция характеризуется выделением из внутреннего угла слизисто-гнойного или гнойного секрета, накапливающегося вначале в конъюнктивальном мешке, а затем вытекающего в виде шнура.

Внутривенное введение туберкулина у зараженных животных вызывает общую системную реакцию, клинически проявляющуюся повышением температуры тела, учащением пульса и дыхания, угнетением общего состояния животного и некоторыми другими внешними изменениями. Эти явления достигают максимума развития через 6-8 ч и исчезают через 20-24 ч. У некоторых животных, особенно с активным туберкулезным процессом, после внутривенной инъекции туберкулина развивается шоковое состояние, которое может закончиться гибелью. На вскрытии у таких животных обнаруживают множественные кровоизлияния в брюшной и грудной полостях, кровенаполненность печени и селезенки, изменения в легких. По наиболее часто используемой методике исследования внутривенной пробой у животного предварительно определяют среднюю температуру тела, измеряя ее утром, днем и вечером. Затем внутривенно вводят 5000 ME туберкулина в 1 мл физиологического раствора на каждые 100 кг массы животного и измеряют температуру тела через каждые 3 ч в течение 9-12 ч. Реагирующими считают животных с повышением на 0,9-1 °C и более против средней. Измерять температуру тела необходимо каждые 3 ч в течение 9 ч после инъекции аллергена.

Для применения аллергических методов исследования имеется ряд противопоказаний. Так, не следует вводить туберкулин животным в течение трех недель после вакцинации их против инфекционных болезней, в особенности против сибирской язвы, эмкара и др. Подкожную и внутривенную пробы нельзя применять при повышенной температуре тела, а также для исследования самок во второй половине беременности, офтальмопробу - при конъюнктивитах или других заболеваниях глаз, а также при возможности возникновения конъюнктивитов (пастбищное содержание). Нельзя исследовать также животных в состоянии переохлаждения и перегрева, поскольку в первом случае возможно подавление реакции, а во втором - развитие ее. После перегонов и перевозок животные должны отдохнуть не менее суток. Нельзя вводить туберкулин в кожу, если в ней и в подкожной клетчатке в области шеи имеются какие-либо изменения (рубцы, уплотнения, абсцессы, раны, поражения грибками, клещами или гельминтами). Введение лекарственных веществ и вакцин в области шеи вызывает морфологические и функциональные изменения тканей в этой зоне, что может угнетать туберкулиновую реакцию или, наоборот, неспецифически повышать чувствительность кожи к туберкулину

Как уже отмечено, в настоящее время прижизненная диагностика туберкулеза затруднена из-за широкой распространенности атипичных (нетуберкулезных) микобактерий, сенсибилизирующих животных к туберкулину Для дифференциации специфических и неспецифических (точнее, параспецифических) реакций в благополучных хозяйствах применяют симультанную пробу с туберкулином и комплексным аллергеном из атипичных микобактерий (КАМ). Реакции оказываются более выраженными на аллерген, родственный по антигенному составу тем микобактериям, которые вызвали аллергию у животных. Повысилась значимость постоянного комплексного эпизоотологического контроля благополучия ферм и хозяйств. При этом учитываются не только результаты плановых аллергических исследований и данные лабораторных анализов, но и результаты экспертизы на мясоперерабатывающих предприятиях, при внутрихозяйственном убое животных, контрольном убое реагирующих на туберкулин, вскрытиях трупов. Повысилась значимость учета данных медицинского обследования работников животноводческих ферм. Если в благополучном хозяйстве при проведении плановых аллергических исследований крупного рогатого скота выявляют реагирующих животных, их дополнительно исследуют офтальмо- или внутривенной туберкулиновой пробой. Реагирующих на эти пробы подвергают комиссионному диагностическому убою. При обнаружении типичных для туберкулеза патологических изменений диагноз считают установленным. Если характерные изменения органов и тканей не обнаружены, проводят бактериологическое исследование биоматериала от убитых животных. При выделении культур микобактерий бычьего, человеческого видов или положительной биопробе диагноз также считают установленным. Если реакции на офтальмо- и внутривенную пробы отрицательны, всех животных стада проверяют симультанной аллергической про бой. В случае подтверждения факта сенсибилизации животных атипичными микобактериями стадо считают благополучным по туберкулезу и последующие плановые исследования проводят с применением симультанной пробы. Но в Сибирском регионе, в частности в Новосибирской области, атипичные микобактерии по антигенному составу не соответствуют КАМ, и в данном случае результат будет всегда неопределенный. Для дифференциации неспецифических туберкулиновых реакции в нашем регионе применяют повторное исследование животных через 30 дней половинной дозой туберкулина (5000 ME). При таком исследовании наблюдается феномен выпадения неспецифических реакций и в данном случае реагируют только больные туберкулезом животные.

С учетом результатов испытания внутрикожной туберкулиновой пробой, в основу схемы дифференциальной диагностики неспецифических реакций и туберкулеза у крупного рогатого скота положен достоверный выбор животных для диагностического убоя по следующим взаимодействующим и усиливающим друг друга критериям:

  • - пониженная реактивность организма животных, сенсибилизированных факторами немикобактериальной этиологии, к туберкулину в дозе 5000 ME. Достоверный контроль теста - совпадение в подавляющем большинстве реакций на дозы туберкулина 10000 и 5000 ME у больного туберкулезом крупного рогатого скота;
  • - выпадение реакций на внутрикожное введение туберкулина у животных, сенсибилизированных факторами немикобактериальной этиологии.

Контролем достоверности этой пробы является невы-падение реакций в этот срок у больных туберкулезом животных. Согласно схеме, поголовье крупного рогатого скота благополучной по туберкулезу фермы исследуют с профилактической целью туберкулиновой пробой в обычном порядке - два раза в год. При выявлении единично реагирующих на туберкулин (до 10 голов) убивают всех животных с последующей тщательной ветеринарно-санитарной экспертизой внутренних органов, лимфатических узлов и бактериологическим исследованием биоматериала.

При установлении туберкулеза проводят оздоровительные мероприятия в соответствии с «Инструкцией о мероприятиях по профилактике и ликвидации туберкулеза животных» (1988). Если при аллергическом исследовании выявляют более 10 реагирующих на туберкулин животных, убивают 2-3 головы с наиболее выраженными реакциями и далее поступают как изложено выше. Остальных реагирующих на туберкулин животных (если туберкулез не подтвержден у убитых животных на вскрытии) через 30 дней переисследуют туберкулином в дозе 5000 ME. При этом бе-зыгольный инъектор (БИ-7, МБИ) регулируют на введение стандартного разведения аллергена в объеме 0,1 мл. Далее проводят отбор животных для контрольного диагностического убоя. В первую очередь отбирают животных, давших при переисследовании реакцию на введение уменьшенной дозы туберкулина с наибольшей интенсивностью - максимальным утолщением кожной складки. Если имеются данные, учитывают повторяемость проявления туберкулиновых реакций у одних и тех же животных за ряд предыдущих исследований. При диагностическом убое животных ветеринарно-санитарной экспертизе подвергают лимфатические узлы (заглоточные, подчелюстные, бронхиальные, средостенные, предлопаточные, мезентериальные, надвыменные и др.), внутренние органы и отбирают пробы биоматериала для бактериологического исследования. Если комплексными исследованиями туберкулез исключен, туберкулиновые реакции считают неспецифическими, а ферму (стадо) - благополучной по туберкулезу. Реагирующих на туберкулин животных оставляют в стаде, а продукцию от них - молоко, мясо, приплод - используют без ограничений. Из данной фермы допускается реализация племенного поголовья, не реагирующего на внутрикожное введение туберкулина. Если при последующих профилактических исследованиях вновь выявляются реагирующие на туберкулин животные, благополучие фермы (стада) по туберкулезу контролируют по изложенной схеме.

В случаях выявления свойственных туберкулезу изменений в органах и тканях убитых на мясо животных из благополучных хозяйств в двухнедельный срок исследуют все поголовье соответствующего стада в целях подтверждения или исключения туберкулеза. При выявлении в благополучном хозяйстве реагирующих на туберкулин свиней, коз и овец проводят диагностический убой 3-5 животных с наиболее выраженными реакциями. Независимо от наличия или отсутствия патологических изменений отбирают материал для бактериологического исследования. В случае выделения культур микобактерий бычьего, человеческого видов или положительной биопробы туберкулез считают установленным. Если у павшей, убитой на мясо или убитой реагировавшей на туберкулин птицы обнаруживают свойственные туберкулезу патологические изменения, делают бактериоскопию биоматериала.

 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ ОРИГИНАЛ   След >